Ud over COX-1: aspirins virkninger på blodpladernes biologi og potentielle mekanismer til kemoprævention

Det er vigtigt for blodpladerne at spille en afgørende rolle i hæmostase, trombose og opretholdelse af blodkarrenes integritet. Utilstrækkelig regulering i trombocytaktiviteten kan føre til uhensigtsmæssig blødning, mens overdreven aktivitet fører til trombose og akutte iskæmiske hændelser. Koagulationsprocessen reguleres af glycoproteiner og receptorer på membranoverfladen, der udløser koagulationskaskaden efter binding af eksogene effektorer som f.eks. adenosindiphosphat (ADP), thromboxan A2 (TXA2), serotonin, kollagen, thrombin og epinephrin. Den grundlæggende sekvens i trombocytaggregationen foregår i tre trin: initiering, udvidelse og stabilisering. I initieringsfasen bliver blodpladerne bundet til eksponerede von Willebrand-faktor (vWF)/kollagenkomplekser og forbliver på stedet for vaskulær skade og respons længe nok til at udløse yderligere aktivering af kollagen. Forstærkning er karakteriseret ved en anden bølge af sekretion og aggregering og forstærkes yderligere af trombocytmedieret frigivelse af thrombin, adenosindiphosphat (ADP) og thromboxan A2 (TXA2). Den anden bølge markerer også udvidelsesfasen, hvor nyankomne trombocytter klæber til det oprindelige trombocytmonolag. Efter interaktion mellem proteinreceptor og effektor fortsætter aktiverede trombocytter med at aggregere og danne broer mellem overfladeglykoproteiner, fibrinogen, fibrin og vWF til aktiverede glykoproteiner. Denne stabiliseringsfase omfatter efterfølgende signalhændelser i dannelsen af blodpladepropper, der muliggør konsolidering af blodpladeaggregatet for at forhindre, at det spredes af forskydningskræfter i det cirkulerende blod.

Signalering i blodpladeaggregation begynder med aktivering af receptorerne på blodpladeoverfladen af agonister såsom kollagen, thrombin, ADP, TXA2 og epinephrin. Aktivering af disse GPCR-receptorer fører til aktivering af phospholipase A2, som spalter phosphotidylcholin og andre membranfosfolipider, hvorved arachidonat frigøres fra C2-positionen i glycerolryggen. Arachidonat kan omdannes til en række prostaglandiner (PGD2, PGI2, PGE2, PGF2α,), som formidler det proinflammatoriske respons. Desuden inducerer thromboxaner, såsom TXA2, frigivelse, aggregering og koagulering af blodplader og forstærker desuden den cirkulerende aktivering af blodpladerne. Prostaglandin endoperoxidsyntase-1 (PGSH-1)/cyclooxygenase-1 (COX-1) udfører de indledende cyclooxygenase- og peroxidasereaktioner for at omdanne arachidonsyre til prækursormetabolitterne prostaglandin G2 og prostaglandin H2. Disse er kemisk bearbejdet til at generere andre prostaglandiner, herunder TXA2, som er ansvarlig for størstedelen af det trombocytafledte respons. En oversigt over de signalbegivenheder, der finder sted under trombocytaktivering, er vist i fig. 3.

Aspirin modulerer trombocytaktivitet og biologi – cyclooxygenasehæmning

Aspirin hæmmer trombocytaggregation og prostaglandinfrigivelse . Tidlige undersøgelser med aspirin radiomærket med 14C ved acetatcarbonylkulstoffet viste <0,1 % af 14C-radiomærket blev optaget af blodpladerne, og at aktiviteten overvejende var forbundet med tre proteiner . Selv om associeringen var irreversibel, hvilket indikerer dannelsen af en kovalent binding, viste det sig kun at være mættet ved biologisk relevante koncentrationer for et enkelt 85 kDa-protein. De to andre opløselige trombocytproteiner viste ikke-mættelig acetylering, hvilket tyder på, at aspirinafhængig acetylering i trombocytter er både specifik og uspecifik. Det acetylerede 85 kDa enzym viste sig senere at være prostaglandin endoperoxid-syntase-1 (PTGS-1/COX-1) . Hæmning af COX-1 i blodpladerne ved acetyloverførsel er irreversibel, og hæmningen opretholdes i hele blodpladens 10-dages levetid.

COX-1 er et bifunktionelt enzym, der udtrykkes konstitutivt i de fleste væv, og det udfører to forskellige og sekventielle reaktioner på rumligt adskilte, men mekanisk koblede aktive steder. I normale celler er COX-1 membranbundet og indlejret i den luminale overflade af det endoplasmatiske retikulum samt i de indre og ydre overflader af kernehindekuverten. Trombocytter er imidlertid anucleate cellefragmenter og udtrykker i stedet COX-1-proteiner i det tætte rørformede membransystem, der stammer fra det demarkerede membransystem under biogenesen af trombocytter. Dette tætte rørformede membransystem spiller en vigtig rolle ved aktivering af trombocytter og er det vigtigste sted for eicosanoidsyntese i trombocytter . COX-1 homodimeren på 85 kDa indeholder 576 rester, og den er glykosyleret ved forskellige lysinsidekæder. Selv om COX-1 er et af de få proteiner, der er blevet forbundet med aspirinhæmning på dets aktive sted, er det vigtigt at bemærke, at glykosylering af lysinrester forstærker acetylering af andre rester, og i dette tilfælde serinen på COX-1’s aktive sted . Hver strukturel COX-1-underenhed indeholder tre foldningsdomæner: et epidermal vækstfaktor-domæne, et membranbindingsdomæne og et katalytisk aktivt sted. Det katalytiske domæne indeholder et cyclooxygenase-site, der udfører dioxygeneringen af arachidonsyre til dannelse af en hydroxyl endoperoxid prostaglandin G2 (PGG2), mens det tilstødende peroxidaseaktive site udfører reduktionen af PGG2 til PGH2. Over for det membranaktive domæne, inden for det katalytiske domæne, ligger det peroxidaseaktive sted, som har en hæm-kofaktor bundet til en lav spalte. Hæmgruppen er afgørende for aktiveringen af et tyrosylradikal i det aktive sted for cyclooxygenase med henblik på lipidperoxidation af arachidonsyre. Over for det hæm-bundne peroxidase-sted i toppen af en tunnel, der har sit udspring i det membranbindende domæne, ligger det aktive cyclooxygenase-sted. Arachidonsyre binder sig på dette sted, hvilket resulterer i en omplacering af substratets carboxylat til dioxygenering . Strukturelle undersøgelser af COX-1 fra får behandlet med 2-bromoacetoxybenzonsyre tyder på, at bindingen af arachidonsyre til cyclooxygenase-enden af det aktive sted og dermed den dobbelte oxygenering af arachidonsyre hæmmes som følge af acetylering af serin 530 .

Ireversibel hæmning af COX-1 ved aspirinacetylering af serin på det aktive sted reducerer prostaglandinbiosyntesen dramatisk. I blodpladerne kan COX-1 ikke hurtigt regenereres, og COX-1-aktiviteten kan derfor kun genoprettes ved ny biogenese af blodpladerne. Syntesen af thromboxan A2, prostaglandin E2 og prostacyclin (PGI2) er mest påvirket i aspirinbehandlede trombocytter, hvilket resulterer i en mangel på koagulationsmekanismen , nedsat sekretion af maveslimhinden, øget irritation af mavesyrer , samt ændret patofysiologisk koagulation og vasodilation/forsnævring .

COX-2 er 60% identisk med COX-1 på aminosyreniveau, og deres tredimensionelle strukturer er næsten overlappende. COX-2 er inducerbar, og dens ekspression forstærkes af de samme prostaglandiner, som syntetiseres af COX-1 i blodplader og epitelceller. COX-2 overudtrykkes under megakaryocytopoeisis og er blevet identificeret i tværsnitsprøver af knoglemarvsprøver fra patienter med kronisk myeloid leukæmi og polycytemia vera . En anden undersøgelse karakteriserede COX-2 ekspressionsniveauet i trombocytter i forhold til COX-1 ved direkte måling af mRNA-niveauet . Det blev konstateret, at trombocytter udtrykker COX-2 på et niveau, der kan sammenlignes med visse maligne epitelceller, om end på et betydeligt lavere niveau end COX-1 i trombocytter. Acetylering af COX-2 i endothel- og epitelceller hæmmer biosyntesen af PGI2 og PGE2, som har forskellige virkninger på downstream-processer som f.eks. inflammation. Selv om aspirin-medieret hæmning af COX-1 og COX-2 resulterer i forskellige profiler af hæmning af prostaglandinbiosyntesen, er grundlaget for hæmning i begge tilfælde blokering af prostaglandin endoperoxid-syntase og deraf følgende reduktion i multifunktionelle prostaglandin H2-niveauer. COX-3’s rolle i forbindelse med trombocytbiologi er fortsat ukendt.

Den COX-hæmmende aktivitet af aspirin er afhængig af den administrerede dosis. Lave doser, dem der ligger mellem 75 og 300 mg, resulterer i selektiv hæmning i trombocytters TXA2-produktion uden at undertrykke prostacyclin (PGI2), en almindelig trombocytantagonist og vasodilator. PGI2 forventes hovedsageligt at blive afledt af vaskulær COX-2, hvilket tyder på, at COX-2-hæmningen er minimal i lavdosisregimet. Højere doser (>1200 mg) har analgetiske og antiinflammatoriske egenskaber, egenskaber, der er forbundet med den patofysiologiske hæmning af COX-1 og COX-2. Det er vigtigt at bemærke, at COX-2 også kan udnytte arachidonsyre til syntese af lipoxiner, især 15-hydroxyeicosatetraensyre (15-HETE). Denne biosynteserute forventes at forblive intakt, selv efter COX-2 acetylering . Denne differentierede hæmning af COX-aktiviteterne kan til dels forklares ved aspirins relative hæmmende virkning. Selv om aspirin typisk opfattes som en uspecifik COX-hæmmer, er det meget selektivt for COX-1 i forhold til COX-2. Som det fremgår af Blanco et al. , er aspirins IC50 for COX-1 ca. 3,5 μM, mens IC50 for COX-2 er ca. 30 μM. Mens de aspirinreaktive aktive steder i begge enzymer er homologe, resulterer acetylering af Ser-516 i COX-2 kun i delvis hæmning af den katalytiske aktivitet . I betragtning af den opnåelige serumkoncentration i lavdosisregimet (~7 μM) er det usandsynligt, at COX-2 er acetyleret med mere end 5 %, mens COX-1, der stammer fra blodpladerne, sandsynligvis er >70 % acetyleret . Dette tyder på, at regelmæssig lavdosisaspirin uvægerligt vil opretholde COX-1-hæmning i cirkulerende trombocytter med minimal effekt på hæmningen af perifert COX-2. En oversigt over virkningerne af lavdosis- og højdosisaspirin på COX-aktivitet i blod og væv er vist i tabel 1.

Aspirin-afhængig acetylering af blodplade-interagerende proteiner i blodet

Blodpladerne udtrykker en række overfladereceptorer, der gør det muligt for dem at interagere med plasma- og blodproteiner, patogener, patogenrelaterede produkter og det betændte endotel. Overfladereceptorer er afgørende for blodpladernes adhæsion til det skadede vaskulatur, dannelse af den koagulerende trombus og aktivering via en række metaboliske effektorer. Interaktionen mellem trombocytter og andre blodproteiner i det systemiske kredsløb er afgørende for udførelsen og opløsningen af koagulationsreaktionen. Interessant nok modificeres mange af disse proteiner også af aspirin.

Fibrinogen

Farr og medarbejdere identificerede i 1968 fibrinogen som et mål for acetylering af aspirin. Fibrinogen findes som et opløseligt protein i plasma samt som et intracellulært membranassocieret protein i trombocytter . Fibrinogen udgør 3-10 % af det samlede trombocytprotein (med tæt på 25 % fundet i α-granuler ) og frigives ved trombocytaktivering. Fibrinogen er blevet rapporteret at blive acetyleret in vitro og in vivo af aspirin for at danne ε-N-acetyllysin-derivater med gennemsnitligt tre rester af fibrinogen, der undergår modifikation. Acetyleret fibrinogen øger fibrinproppernes modtagelighed for lysis.

Albumin

Albuminmodifikation ved acetylering med aspirin har været kendt i over et halvt århundrede . En række undersøgelser fra Farr og medarbejdere har vurderet de mulige konformationseffekter, der udløses af acetylgruppetilsætning til albumin . Den mest diskuterede modifikation af serumalbumin i litteraturen fokuserer på acetylering af lysinrester . Humant serumalbumin er også blevet observeret til at påvirke blodplade-blodplademekanismerne ved at påvirke calciumreguleringen .

Hæmoglobin

Den måske vigtigste komponent i blod-plasma-miljøet, hæmoglobin, undergår aspirinafhængig acetylering in vitro, og det formodes at undergå lignende modifikationer ved høje aspirindoser in vivo . Undersøgelser af hæmoglobinacetylering ved aspirin viste fald i proteinglykation, og i tilstedeværelse af høje glukosekoncentrationer øges hæmoglobinacetylering ved aspirin , en effekt, der også er observeret i serumalbumin. Aspirin er i stand til at acetyle en række lysinrester i α- og β-kæden af hæmoglobin, uden at det har en virkning på dets strukturelle konformation eller dets iltbindings- og transportfunktioner . Hæmoglobin er i stand til at udløse trombocytaggregation via interaktioner med GP1βα, et af de mange receptorproteiner på trombocytoverfladen. Relativt lave koncentrationer af hæmoglobin er også i stand til at fremkalde trombocytaggregation, selv om virkningen af acetylering af hæmoglobin med aspirin på interaktionerne mellem hæmoglobin og trombocytter fortsat er ukendt .

Effekt af aspirin på trombocytaggregatet: implikationer for kræft

Cyclooxygenasehæmning og den samtidige reduktion i tromboxanbiosyntesen resulterer i reduceret trombocytaggregation, ekspression af P-selectin og svækket koagulationsfunktion. Ud over sin rolle i modulering af trombocytaggregation har aspirin også vist sig at ændre profilen af eksprimerede og sekreterede proteiner i trombocytter. Mange af disse proteiner er involveret i formidlingen af koagulationsreaktionen og rekrutteringen af immunceller til skadestedet . Mange proteiner, der findes i blodpladernes “releasat”, kan imidlertid også spille en vigtig rolle i forbindelse med fremme af angiogenese og tumorvækst.

Aspirin har vist sig at hæmme frigivelsen af interleukin 7 (IL-7) fra blodplader stimuleret med thrombinreceptoraktiverende peptid (SFLLRN). Raske patienter, der tager aspirin, viste også signifikant lavere plasma IL-7 . Dette proinflammatoriske cytokin har vist sig at spille en central rolle i både B-celle- og T-cellemodning . IL-7 har også vist sig at have både pro- og antitumorvirkninger, hvor sidstnævnte hovedsagelig skyldes hæmning af apoptose gennem regulering af BCL2 . Trombocytter er også en kilde til pro-angiogene faktorer, herunder VEGF og angiopoetin-1, og noget tyder på, at regelmæssig brug af aspirin reducerer plasmakoncentrationen af begge faktorer, selv om det er uklart, om dette udelukkende er en funktion af trombocytafgivelsen . Dette understøttes af en klinisk undersøgelse, hvor aspirinbehandling syntes at favorisere en generel antiangiogen balance hos kvinder med brystkræft, der modtog tamoxifen, som vurderet ved faldende plasma VEGF-niveauer og trombinreceptormedieret frigivelse af TSP-1 og VEGF fra blodplader .

Coppinger et al. udførte en massespektrometri-baseret proteomisk undersøgelse for yderligere at udforske sammensætningen af blodpladefrigivelsen som en funktion af aspirinbehandling. I denne undersøgelse resulterede behandling af humane trombocytter med lav dosis aspirin (20 μM) efter stimulering med kollagen, SFLLRN eller ADP i et bredt fald i mængden af protein, der blev fundet i releasatet, selv om omfanget af denne reduktion var afhængig af den anvendte agonist. Aspirinbehandling viste sig også at resultere i nedsatte niveauer af vækstregulerende vækstfaktor (GRO), trombocytafledet vækstfaktor (PDGF), angiogenin, RANTES og oncostatin M (OSM) i trombocytafgivelsen, især efter stimulering med kollagen. Mens disse og andre trombocytakiner, der stammer fra blodplader (f.eks, CXCL4 og CTGF ), er kritiske for regulering af vaskulær reparation, spiller de også en rolle i at drive tumorigenese, angiogenese og metastase.

Definering af aspirinacetylomet

Som nævnt ovenfor er aspirin kendt for at acetylerer en lang række intracellulære og ekstracellulære proteinmål, især ved sidekæder og N-terminale aminogrupper. Desværre har der ikke været nogen omfattende proteomiske undersøgelser, der specifikt behandler spørgsmålet om, hvilke trombocytproteiner ud over COX-enzymerne, der acetyleres af aspirin, eller den biologiske rolle af disse ikke-kanoniske acetyleringer. I dette afsnit vil vi overveje tidligere proteomiske undersøgelser for at identificere ikke-kanoniske mål for aspirin-medieret acetylering og forsøge at relatere dem til den nuværende status for trombocytproteomik.

Der har været adskillige proteomiske undersøgelser, der har forsøgt at definere det sæt proteiner, der acetyleres af fysiologiske koncentrationer af aspirin i forskellige cellelinjer. Bhat og medarbejdere identificerede 33 cellulære proteiner, der acetyleres af aspirin efter berigelse med et antiacetyllysin-antistof . Efterfølgende analyse ved massespektrometri identificerede tilstedeværelsen af acetylerede cytoskeletale og metaboliske enzymer, herunder glukose-6-fosfatdehydrogenase (G6PD), laktatdehydrogenase, enolase, pyruvatkinase og transketolase, selv om kun G6PD blev signifikant hæmmet af aspirinmedieret acetylering in vitro. Dette tyder på, at aspirin kan blokere flux gennem pentosephosphatvejen, selv om yderligere undersøgelser er nødvendige for at bekræfte dette. Denne gruppe viste også, at aspirin acetylerer p53, hvilket resulterer i øget DNA-binding, ekspression af p21Cip og forøgelse af apoptotisk celledød i tilstedeværelse af camptothecin . Mens disse virkninger er blevet påvist i flere tumorcellelinjer, tyder fraværet af p53 i trombocytproteomet samt manglen på et funktionelt genom i trombocytter på, at p53-acetylering vil have minimal indvirkning på trombocytbiologien.

Mere nylige fremskridt inden for højtydende proteomik kombineret med aktivitetsbaserede sonder har ført til identifikation af hundredvis af putative aspirinmedierede acetyleringer. I en tilgang blev acetylgruppen i aspirin erstattet med pentynsyre for at generere et alkyne-holdigt aspirinderivat (AspAlk) . I modsætning til aspirin resulterer acetyloverførsel ved hjælp af AspAlk i inkorporering af en azidreaktiv alkyne på steder, der normalt acetyleres af aspirin. Efter inkubation af AspAlk med levende kolorektal HCT-15-celler blev proteiner, der blev acetyleret af AspAlk, mærket med biotin via kobberkatalyseret azid-alkyne-cycloaddition (CuAAC) og isoleret ved streptavidin-pulldown. Efter analyse med LC-MS var forfatterne i stand til at identificere 120 proteiner med en betydelig berigelse af AspAlk-acetylering i forhold til DMSO-kontroller. De mest berigede klasser af proteiner i denne undersøgelse var dem, der var involveret i proteinsyntese og -foldning, cytoskeletale proteiner og metaboliske enzymer. Histonacetylering blev også observeret og bekræftet biokemisk. Dette arbejde blev udvidet i et nyligt manuskript af Shen, Lin og medarbejdere, som brugte et syre-labilt biotinazid til at lette genfinding af AspAlk-modificerede proteiner efter biotinkonjugering og streptavidin pulldown . Denne strategi resulterede i identifikation af over 500 acetylerede proteiner. En analyse af listen over målene viste en betydelig acetylering inden for mTOR-vejen, som kontrollerer mange centrale cellulære funktioner, herunder proteinsyntese og autofagi. Forfatterne validerede de første proteomiske observationer ved at vise, at aspirinbehandling af både HCT116-kolorektalceller og embryonale fibroblaster fra musen reducerede de novo-proteinsyntesen og inducerede autofagi. Induktionen af autofagi ved aspirin er af særlig interesse i lyset af en nylig undersøgelse, der viser, at autofagi er afgørende for normal trombocytfunktion og opreguleres under trombocytstimulering . Desuden er et funktionelt autofagisk maskineri afgørende for blodpladernes antikoagulerende aktivitet, hvilket er påvist i musemodeller, hvor Atg7 er slået ud af blodpladerne. Mens den funktionelle sammenhæng mellem aspirin-medieret acetylering og induktion af trombocytautofagi fortsat er uklar, kan hæmning af pentosephosphatvejen (PPP) gennem G6PD-blokade eller forstyrrelse af mitokondrie-respirationen gennem acetylering af malatdehydrogenase og/eller isocitratdehydrogenase øge den intracellulære oxidative byrde, en kendt udløsende faktor for autofagi . Alternativt er der rigelig dokumentation for aspirin-medieret acetylering af chaperoner, især heat shock proteiner og peptidyl-prolyl isomeraser, som kan forringe korrekt proteinfoldning og udløse autofagisk fjernelse af fejlfoldede proteiner.

En anden nylig proteomisk undersøgelse af Tatham og medarbejdere brugte 3H-mærket aspirin til at identificere steder for aspirin-medieret acetylering i HeLa-celler ved massespektrometri . I denne tilgang resulterer brugen af tritieret aspirin i en +3 Da-masseforskydning i forhold til normal acetat og muliggør en mere præcis diskrimination af aspirinmedieret acetylering i forhold til endogen acetylering. Denne metode afslørede over 12 000 aspirinmedierede acetyleringer i over 3 700 unikke proteiner. Det er interessant, at mange af de proteiner, der blev fundet acetyleret af aspirin, også blev fundet acetyleret i fravær af aspirin, hvilket tyder på, at aspirin “forstærker” eksisterende proteinacetyleringssteder. Forfatterne til denne undersøgelse fandt også, at i de fleste tilfælde blev <1% af de samlede steder, der var tilgængelige for acetylering på et bestemt protein, acetyleret af aspirin, hvilket antyder, at stoiometrien af uspecifik aspirin-medieret acetylering kan være utilstrækkelig til at producere betydelige biologiske virkninger uden farmakologisk blokade af endogene deacetylaseaktiviteter.

Denne undersøgelse viste også en betydelig acetylering af histonproteiner, hvor størstedelen af den aspirinmedierede acetylering fandt sted i histonkernen snarere end i de N-terminale haler. Histonacetylering er blevet observeret i flere proteomiske undersøgelser og er ikke overraskende i betragtning af den høje andel af nukleofile lysinrester i histoner, som spiller en væsentlig rolle i elektrostatisk DNA-binding. Histonacetylering spiller en afgørende rolle i DNA-binding og er en velkendt epigenetisk mekanisme til regulering af genekspression . Selv om blodpladerne er anucleate, har tidligere transkriptomiske undersøgelser identificeret histonspecifikke transkriptioner i blodpladerne, især H2A, H2B, H3 og H4 . Mens histonacetylering af aspirin er blevet påvist på overbevisende vis, er det vigtigt at bemærke, at histonekspression ikke er blevet bekræftet i blodpladerne. Man har i stedet postuleret, at tilstedeværelsen af histon-transskriptioner i blodplader er et artefakt af afvigende cellecyklus i megakaryocytter, som giver anledning til blodplader . Endnu vigtigere er det, at histonernes rolle i kontrollen af ekspression på DNA-niveau er fraværende i anucleate trombocytter.

Aspirins virkninger på trombocytmetabolismen

Trombocytmetabolismen er primært oxidativ i modsætning til neutrofile, som primært er glycolytiske . Blokade af anaerob glykolyse nedsætter ikke ATP og hæmmer heller ikke trombocytfunktionen. Det er blevet vist, at acetylering af enzymer i tricarboxylsyrecyklus (TCA) og komponenter i elektrontransportkæden (ETC) er en almindelig reguleringsmetode, især for enzymer, der er involveret i metabolisme, såsom malatdehydrogenase i kulstofmetabolisme , regulering af lipidmetabolisme og i urinstofcyklusen til ammoniakafgiftning . Det følger heraf, at acetylering af TCA-cyklusenzymer og ETC-komponenter kan have en betydelig virkning på blodpladernes bioenergetik. Proteomiske undersøgelser af aspirinacetylering har konsekvent afsløret aspirinmedieret acetylering af malatdehydrogenase, som regulerer skiftet mellem kulhydrat- og fedtsyresyntese , og isocitratdehydrogenase, som reguleres i mitochondrierne ved deacetylering gennem sirtuinproteiner (Sirt3 og Sirt5) . Sirtuin deacetylaseaktivitet er forbundet med en række TCA-enzymer i den mitokondrielle matrix og menes at regulere antioxidantgenoprettelse, regulering af TCA-flux og anapleurose . Selv om vi ved udarbejdelsen og trykningen af denne gennemgang ikke er bekendt med nogen undersøgelser, der direkte omhandler omfanget af aspirin-medieret acetylering af metaboliske enzymer eller effekten af aspirin på metabolisk flux, tyder de proteomiske beviser på, at dette kan være en vigtig ikke-kanonisk effekt af aspirin på blodpladernes biokemi.

Effekter af aspirin på blodpladernes lokalisering i tumorer

Nyt bevismateriale er ved at dukke op for, at blodpladerne selv kan spille en betydelig rolle i carcinogenese og mere specifikt i udviklingen af metastaser. I metastatiske musemodeller, hvor tumorceller injiceres direkte i cirkulationen, har strategier til at reducere det cirkulerende antal blodplader vist sig at være effektive til at reducere tumorbyrden . Andre undersøgelser af metastaserende modeller, hvor opløseligt fibrin og tumorceller blev injiceret sammen for at øge koagulationseffekten, viste en øget forekomst af metastaser in vivo . Disse undersøgelser blev støttet af in vitro-forsøg, hvor opløseligt fibrin forbedrede interaktionerne mellem blodplader og tumorceller under kulturbetingelser . Disse undersøgelser understøtter hypotesen om, at aktivering af trombocytaggregation ud over den forventede forøgelse af fibrin øger trombocytternes adhæsion til tumorceller og letter metastatisk spredning. Ud over fibrin har yderligere undersøgelser overvejet rollen af trombin, PAR-1 og koagulationsfaktor VII (FVII) , og deres sammenhæng med forøgelse af kræftcellers levedygtighed , kræftvækst og spredning , øget tumormalignitet og metastatisk støtte .

Ud over at modulere tumorcellers biologi i systemisk cirkulation har blodplader også vist sig at spille en vigtig rolle i tumorcellers vækst. I en undersøgelse blev det vist, at aspirin signifikant mindskede graden af proliferationsceller både in vitro og in vivo af æggestokkræft . Samme undersøgelse viste også, at aktivering af trombocytter kan øge proliferation og tumorcellevækst efter saminkubation af tumorceller og trombocytter. Hæmning af blodpladernes adhæsive receptorer, herunder GPIβα, GPIIβIIIα og P-selectin, mindskede imidlertid ikke de proliferative virkninger fra blodpladerne. Dette tyder på, at proteiner og andre faktorer, der udskilles af blodplader, kan spille en rolle i reguleringen af tumorcellers vækst. For eksempel blev det observeret, at reduktionen af TGF-β1 fra blodpladerne mindskede proliferationen af ovariecancerceller, der blev udsat for blodplader . Desuden har aspirin også vist sig at forhindre metastase af kolorektal cancer gennem en COX-1-mekanisme, der involverer TXA2 og PGE2 , hvilket tyder på, at aktiverede blodplader kan understøtte metastase gennem COX-1-afhængig prostaglandinproduktion. Endelig er det blevet vist, at et nyt aspirin-phosphotidylcholin-konjugat (Aspirin-PC) forstyrrer den epithelial-mesenchymal overgang (EMT), der er induceret af trombocytter og tumorceller, gennem VEGF- og thromboxanfrigivelse. Denne formulering viste sig også at hæmme celleproliferation og angiogenese og samtidig øge apoptose i ovarie- og kolorektalcellemodeller .