In den meisten Gruppen führt ein Männchen, nachdem es sich einem Weibchen erfolgreich genähert und es bestiegen hat, seinen linken Pedipalp in die linke Öffnung ihres Genitalbaus und den rechten Pedipalp in die rechte Öffnung ein. Bei einigen primitiven Spinnen (z. B. Haplogynen, Mygalomorphen) und einigen anderen führt das Männchen beide Pedipalpen gleichzeitig in den Genitalschlitz des Weibchens ein.
Das weibliche Genital oder Epigynum ist eine gehärtete Platte auf der Unterseite des Hinterleibs vor der Gonopore. Nachdem die Spermien in das Epigynum gelangt sind, wandern sie in Behältnisse (Spermathek), die mit den Eileitern verbunden sind. Die Eier werden befruchtet, während sie die Eileiter durchlaufen und durch die Gonopore austreten.
Die Kraft, die die Injektion der Spermien aus dem Pedipalpen des Männchens in den Rezeptor des Weibchens bewirkt, ist nicht mit Sicherheit festgestellt worden, aber möglicherweise handelt es sich um einen erhöhten Blutdruck, der das weiche Gefäßgewebe (Hämatodocha) zwischen den harten Platten der Pedipalpen ausdehnt. Dies führt dazu, dass sich eine knollenförmige Struktur, die einen Kanal enthält, verdreht und in das Epigynum des Weibchens einhakt, um die Spermien wie mit einer Spritze zu injizieren.
Die Paarung kann bei einigen Arten nur Sekunden, bei anderen jedoch Stunden dauern. Manche Männchen laden ihre Pedipalpen wieder auf und paaren sich erneut mit demselben Weibchen. Nach der Paarung schmieren die Männchen einiger Arten ein Sekret über das Epigynum, einen so genannten Epigynalpfropf, der verhindert, dass sich das Weibchen ein zweites Mal paaren kann. Männliche Spinnen sterben in der Regel kurz nach oder sogar während des Paarungsvorgangs. Das Weibchen einer europäischen Kugelspinnenart beißt sich in den Unterleib des Männchens und hält es während der Paarung fest. Obwohl einige Weibchen das Männchen nach der Paarung fressen, ist diese Praxis nicht üblich. Das Männchen der Schwarzen Witwe (Gattung Latrodectus) zum Beispiel stirbt in der Regel Tage nach der Paarung, obwohl es gelegentlich nach der Paarung so schwach ist, dass es vom Weibchen gefangen und gefressen wird. Man nimmt an, dass die männlichen Spinnen der Gattung Nephilengys malabarensis aus Südostasien und dem südwestlichen Pazifik dem sexuellen Kannibalismus durch die Fernkopulation entgehen, bei der sich das Kopulationsorgan des Männchens während der Paarung ablöst und im Weibchen verbleibt, um eine längere Spermienübertragung zu ermöglichen. Die Weibchen einiger Arten paaren sich nur einmal, während andere sich mehrmals mit demselben Männchen oder mit mehreren verschiedenen Männchen paaren. Die langlebigen Weibchen der mygalomorphen Spinnen müssen sich wiederholt paaren, da sie sich ein- bis zweimal im Jahr häuten, einschließlich der Auskleidung der Spermathek.
