Na maioria dos grupos, após um macho se aproximar com sucesso de uma fêmea e montá-la, ele insere seu pedipalp esquerdo na abertura esquerda da estrutura genital dela e o pedipalp direito na abertura direita. Em algumas aranhas primitivas (por exemplo, haplogynes, mygalomorphs) e algumas outras, o macho insere ambos os pedipipais simultaneamente na fenda genital feminina.
A estrutura genital feminina, ou epigynum, é uma placa endurecida na parte inferior do abdômen em frente ao gonopore. Após os espermatozóides serem transferidos para a epigna, eles se movem para receptáculos (espermathecas) que se conectam aos oviductos. Os ovos são fertilizados ao passar pelos oviductos e sair pelo gonopore.
A força que causa a injeção de esperma do pedipalpo do macho no receptáculo da fêmea não foi estabelecida com certeza, mas pode envolver aumento da pressão arterial expandindo o tecido vascular mole (hematodocha) entre as placas duras do pedipalpo. Isto faz com que uma estrutura bulbosa contendo um ducto se torça e se prenda na epigina da fêmea e injete o esperma como se estivesse sendo espremido de uma seringa de bulbo.
Acasalamento pode requerer apenas segundos em algumas espécies, mas horas em outras. Alguns machos recarregam seus pedipalps e acasalam novamente com a mesma fêmea. Após o acasalamento, os machos de algumas espécies esfregam uma secreção sobre a epigna, chamada epigynal plug, que impede a fêmea de acasalar uma segunda vez. As aranhas machos geralmente morrem logo após, ou mesmo durante, o processo de acasalamento. A fêmea de uma espécie de tecelão orbital europeu morde o abdómen do macho e agarra-se durante o acasalamento. Apesar de algumas fêmeas comerem o macho após o acasalamento, esta prática não é comum. O macho da viúva negra (gênero Latrodectus), por exemplo, geralmente morre dias após o acasalamento, embora ocasionalmente ele esteja tão fraco após o acasalamento que é capturado e comido pela fêmea. Pensa-se que os machos Nephilengys malabarensis aranhas do sudeste asiático e do sudoeste do Pacífico escapam ao canibalismo sexual através da cópula remota, na qual o órgão copulatório do macho se separa durante o acasalamento e permanece na fêmea, permitindo a transferência prolongada do esperma. As fêmeas de algumas espécies acasalam apenas uma vez, enquanto outras acasalam várias vezes com o mesmo macho ou acasalam com vários machos diferentes. As fêmeas de vida longa das aranhas mygalomorph devem acasalar repetidamente, pois elas derramam a sua pele uma ou duas vezes por ano, incluindo o revestimento da espermathecae.
