Além da COX-1: os efeitos da aspirina na biologia plaquetária e potenciais mecanismos de quimioprevenção

As plaquetas desempenham um papel crítico na hemostasia, trombose e manutenção da integridade dos vasos sanguíneos. Uma regulação inadequada da actividade plaquetária pode levar a hemorragias inadequadas, enquanto que uma actividade excessiva leva a trombose e a eventos isquémicos agudos. O processo de coagulação é regulado por glicoproteínas de superfície da membrana e receptores que desencadeiam a cascata de coagulação após a ligação por agentes exógenos, como adenosina difosfato (ADP), tromboxano A2 (TXA2), serotonina, colágeno, trombina e epinefrina. A sequência básica na agregação plaquetária ocorre em três etapas: iniciação, extensão e estabilização. Na fase de iniciação, as plaquetas tornam-se amarradas a complexos de fator von Willebrand (vWF)/colágeno expostos e permanecem no local de lesão vascular e resposta por tempo suficiente para desencadear ativação adicional pelo colágeno. A amplificação é caracterizada por uma segunda onda de secreção e agregação e é ainda reforçada pela liberação de trombina, adenosina difosfato (ADP) e tromboxane A2 (TXA2) mediada por plaquetas. A segunda onda também marca a fase de extensão na qual as plaquetas recém-chegadas aderem à monocamada plaquetária inicial. Após a interação receptor-efetor de proteína, as plaquetas ativadas continuam a agregar formando pontes entre glicoproteínas de superfície, fibrinogênio, fibrina e vWF para glicoproteínas ativadas. Esta fase de estabilização inclui eventos subsequentes de sinalização na formação do plug plaquetário que permite a consolidação do agregado plaquetário para evitar a sua dispersão por forças de cisalhamento no sangue circulante.

A sinalização na agregação plaquetária começa com a ativação dos receptores na superfície plaquetária por agonistas como colágeno, trombina, ADP, TXA2 e epinefrina. A ativação desses receptores GPCR leva à ativação da fosfolipase A2, que cliva a colina fosfotídica e outros fosfolípidos de membrana, liberando o araquidonato da posição C2 da espinha dorsal da glicerina. O araquidonato pode ser transformado em uma variedade de prostaglandinas (PGD2, PGI2, PGE2, PGF2α) que medeiam a resposta pró-inflamatória. Além disso, tromboxanos, como o TXA2, induzem a liberação de plaquetas, agregação e coagulação, além de amplificar a ativação das plaquetas circulantes. A prostaglandina endoperóxida sintetase1 (PGSH-1)/cicloxigenase-1 (COX-1) realiza as reacções iniciais de ciclo-oxigenase e peroxidase para converter o ácido araquidónico nos metabolitos precursores, prostaglandina G2 e prostaglandina H2. Estas são quimicamente elaboradas para gerar outras prostaglandinas, incluindo a TXA2, que medeia a maior parte da resposta derivada das plaquetas. Um resumo dos eventos de sinalização que ocorrem durante a ativação plaquetária é mostrado na Fig. 3.

Aspirina modula a atividade plaquetária e a inibição da biologia-ciclo-oxigenase

Aspirina inibe a agregação plaquetária e a liberação de prostaglandina . Estudos iniciais usando aspirina radiolabelada com 14C no acetato de carbono carbono mostraram <0,1% do radiolabel 14C foi absorvido pelas plaquetas e que a atividade estava associada predominantemente a três proteínas . Embora a associação fosse irreversível, indicando a formação de uma ligação covalente, verificou-se que ela só era saturável em concentrações biologicamente relevantes para uma única proteína de 85 kDa. As outras duas proteínas plaquetárias solúveis apresentaram acetilação não-saturável sugerindo que a acetilação dependente de aspirina nas plaquetas é específica e não específica. A enzima acetilada 85 kDa foi posteriormente encontrada como endoperóxido de prostaglandina sintetase 1 (PTGS-1/COX-1). A inibição da COX-1 plaquetária por transferência de acetil é irreversível, e a inibição é mantida durante os 10 dias de vida da plaqueta.

COX-1 é uma enzima bifuncional expressa constitutivamente na maioria dos tecidos, e realiza duas reações diferentes e seqüenciais em locais ativos espacialmente distintos, mas mecanicamente acoplados. Em células normais, a COX-1 é ligada à membrana e embutida na superfície luminal do retículo endoplasmático, bem como nas superfícies interna e externa do invólucro nuclear. As plaquetas, entretanto, são fragmentos de células anucleadas e expressam proteínas COX-1 no denso sistema de membrana tubular que se origina do sistema de membrana demarcada durante a biogênese plaquetária. Este denso sistema de membrana tubular desempenha um papel importante na ativação plaquetária, e é o principal local de síntese de eicosanóides em plaquetas. O homodímero de 85 kDa COX-1 contém 576 resíduos e é glicosilado em várias cadeias laterais de lisina. Embora a COX-1 seja uma das poucas proteínas que tem sido associada à inibição da aspirina em seu local ativo, é importante notar que a glicosilação dos resíduos de lisina melhora a acetilação de outros resíduos e, neste caso, a serina no local ativo da COX-1 . Cada subunidade estrutural da COX-1 incorpora três domínios dobráveis: um domínio de fator de crescimento epidérmico, um domínio de ligação membranar e um sítio ativo catalítico. O domínio catalítico contém um sítio de ciclo-oxigenase que realiza a di-oxigenação do ácido araquidônico para formar uma prostaglandina hidroxil endoperóxido G2 (PGG2), enquanto o sítio ativo de peroxidase adjacente realiza a redução de PGG2 para PGH2. Ao contrário do domínio membrana-activo, dentro do domínio catalítico, é o sítio activo da peroxidase que tem um cofactor heme ligado a uma fenda rasa. O grupo heme é essencial para a ativação de um radical tirosil no sítio ativo da ciclo-oxigenase para a peroxidação lipídica do ácido araquidônico. Em frente ao local de peroxidase de ligação heme no topo de um túnel originado no domínio de ligação membranar é o local ativo da ciclo-oxigenase. O ácido araquidônico se liga neste local, resultando em um reposicionamento do carboxilato do substrato para a di-oxigenação . Estudos estruturais da COX-1 ovina tratada com ácido 2-bromoacetoxi benzóico sugerem que a ligação do ácido araquidônico à extremidade da ciclo-oxigenase do sítio ativo, e consequentemente a dupla oxigenação do ácido araquidônico, são inibidas como resultado da acetilação da serina 530 .

Inibição irreversível da COX-1 pela acetilação da serina do sítio ativo diminui drasticamente a biossíntese da prostaglandina. Nas plaquetas, a COX-1 não pode ser rapidamente regenerada, e consequentemente a atividade da COX-1 só pode ser recuperada por uma nova biogênese plaquetária. A síntese de tromboxano A2, prostaglandina E2 e prostaciclina (PGI2) são as mais afetadas nas plaquetas tratadas com aspirina, resultando em deficiência no mecanismo de coagulação, diminuição da secreção da mucosa gástrica, aumento da irritação pelos ácidos gástricos, bem como alteração da coagulação fisiopatológica e vasodilatação/constricção .

COX-2 é 60% idêntica à COX-1 no nível de aminoácidos e suas estruturas tridimensionais são quase sobreponíveis. A COX-2 é induzível, e sua expressão é reforçada pelas mesmas prostaglandinas que são sintetizadas pela COX-1 em plaquetas e células epiteliais. A COX-2 é superexpressa durante a megacariocitopoiese e foi identificada na secção transversal da medula óssea em pacientes com leucemia mielóide crônica e policitemia vera. Outro estudo caracterizou os níveis de expressão da COX-2 em plaquetas em relação à COX-1, medindo diretamente os níveis de mRNA. Foi verificado que as plaquetas expressam a COX-2 em níveis comparáveis a algumas células epiteliais malignas, embora em níveis significativamente inferiores aos da COX-1 plaquetária. A acetilação da COX-2 nas células endoteliais e epiteliais inibe a biossíntese da PGI2 e PGE2, que têm efeitos diferentes sobre os processos a jusante, como a inflamação. Embora a inibição mediada pela aspirina da COX-1 e COX-2 resulte em perfis distintos de inibição da biossíntese da prostaglandina, a base da inibição em ambos os casos é o bloqueio da endoperóxido de prostaglandina sintase e conseqüente redução dos níveis multifuncionais de prostaglandina H2. O papel da COX-3 no contexto da biologia plaquetária permanece desconhecido.

A atividade inibitória da COX da aspirina é dependente da dose administrada. Doses baixas, entre 75 e 300 mg, resultam em inibição seletiva na produção de TXA2 plaquetária sem supressão da prostaciclina (PGI2), um antagonista plaquetário comum e vasodilatador. Espera-se que o PGI2 seja derivado principalmente da COX-2 vascular, sugerindo que a inibição da COX-2 é mínima no regime de baixas doses. Doses aumentadas (>1200 mg) têm propriedades analgésicas e anti-inflamatórias, propriedades associadas à inibição fisiopatológica da COX-1 e da COX-2. É importante notar que a COX-2 também pode utilizar ácido araquidônico para síntese de lipoxinas, particularmente o ácido 15-hidroxiicosato-traenóico (15-HETE). Espera-se que esta via biossintética permaneça intacta mesmo após a acetilação do COX-2. Esta inibição diferencial das atividades do COX pode ser explicada, em parte, pela potência inibitória relativa da aspirina. Embora a aspirina seja tipicamente pensada como um inibidor não específico da COX, ela é altamente seletiva para a COX-1 versus a COX-2. Como visto em Blanco et al. , o IC50 da aspirina para COX-1 é aproximadamente 3,5 μM enquanto o IC50 para COX-2 é aproximadamente 30 μM. Enquanto os sítios ativos aspirina reativos de ambas as enzimas são homólogos, a acetilação do Ser-516 da COX-2 resulta em inibição apenas parcial da atividade catalítica. Dada a concentração sérica alcançável no regime de baixas doses (~7 μM), é improvável que a COX-2 seja mais de 5% acetilada, enquanto que a COX-1 derivada de plaquetas é provavelmente >70% acetilada . Isto sugere que a aspirina regular de baixa dose manterá invariavelmente a inibição da COX-1 nas plaquetas em circulação, com efeito mínimo na inibição da COX-2 periférica. Um resumo dos efeitos das doses baixas e altas de aspirina sobre a atividade da COX no sangue e nos tecidos é mostrado na Tabela 1.

Acetilação dependente da espirina das proteínas de interação plaquetária no sangue

Platelets expressam uma variedade de receptores de superfície que lhes permitem interagir com o plasma e as proteínas do sangue, patógenos, produtos patogênicos e o endotélio inflamado. Os receptores superficiais são críticos para a adesão plaquetária à vasculatura lesada, formação do trombo coagulante, e ativação através de uma série de efetores metabólicos. A interação entre plaquetas e outras proteínas do sangue na circulação sistêmica é crítica para a execução e resolução da resposta de coagulação. Curiosamente, muitas destas proteínas também são modificadas pela aspirina.

Fibrinogênio

Farr e colegas de trabalho identificaram o fibrinogênio em 1968 como um alvo de acetilação pela aspirina. O fibrinogênio é encontrado como uma proteína solúvel no plasma, bem como uma proteína intracelular associada à membrana em plaquetas. O fibrinogênio é responsável por 3-10% da proteína plaquetária total (com cerca de 25% encontrada em α-grânulos) e é liberado na ativação plaquetária. O fibrinogênio foi reportado para ser acetilado in vitro e in vivo pela aspirina para formar derivados de ε-N-acetil lisina com uma média de três resíduos de fibrinogênio em processo de modificação. O fibrinogênio acetilado aumenta a suscetibilidade dos coágulos de fibrina à lise .

Albumina

A modificação da albumina por acetilação por aspirina é conhecida há mais de meio século. Uma série de estudos de Farr e colegas de trabalho avaliaram os possíveis efeitos conformacionais desencadeados pela adição do grupo acetil à albumina . A modificação mais discutida da albumina sérica na literatura centra-se na acetilação dos resíduos de lisina . A albumina sérica humana também tem sido observada para afetar os mecanismos de coagulação plaquetária influenciando a regulação do cálcio .

Hemoglobina

Talvez o componente mais importante do meio hemato-plasma, a hemoglobina, seja submetido à acetilação dependente da aspirina in vitro, e presume-se que seja submetido a modificações semelhantes em altas doses de aspirina in vivo . Estudos de acetilação da hemoglobina pela aspirina demonstraram reduções na glicação protéica, e na presença de altas concentrações de glicose a acetilação da hemoglobina pela aspirina é aumentada, um efeito que também tem sido observado na albumina sérica. A aspirina é capaz de acetilar uma variedade de resíduos de lisina nas cadeias de hemoglobina α e β, sem ter um efeito na sua conformação estrutural ou funções de ligação e transporte de oxigénio. A hemoglobina é capaz de desencadear a agregação plaquetária através de interações com GP1βα, uma das muitas proteínas receptoras de superfície plaquetária. Concentrações relativamente baixas de hemoglobina também são capazes de induzir agregação plaquetária, embora o efeito da acetilação da hemoglobina pela aspirina sobre as interações entre hemoglobina e plaquetas permaneça desconhecido .

Efeito da aspirina no releasato plaquetário: implicações no câncer

Inibição da Ciclo-oxigenase e a redução simultânea da biossíntese de tromboxano resultam em redução da agregação plaquetária, expressão da P-selectina e função de coagulação atenuada. Além de seu papel na modulação da agregação plaquetária, a aspirina também mostrou alterar o perfil das proteínas expressas e secretadas nas plaquetas. Muitas destas proteínas estão envolvidas na mediação da resposta de coagulação e no recrutamento de células imunitárias para o local da lesão. No entanto, muitas proteínas encontradas no “releasato” plaquetário também podem desempenhar um papel importante na promoção da angiogénese e crescimento tumoral.

Aspirina tem demonstrado inibir a libertação de interleucina 7 (IL-7) pelas plaquetas estimuladas com peptídeo activador do receptor de trombina (SFLLRN). Pacientes saudáveis que tomam aspirina também mostraram uma IL-7 plasmática significativamente mais baixa. Esta citocina pró-inflamatória demonstrou ter um papel fundamental na maturação das células B e T. A IL-7 também demonstrou ter efeitos pró e anti-tumor, sendo que este último resulta principalmente da inibição da apoptose através da regulação da BCL2 . As plaquetas são também uma fonte de factores pró-angiogénicos incluindo VEGF e angiopoetina-1 e há algumas evidências que sugerem que o uso regular de aspirina reduz a concentração plasmática de ambos os factores, embora não seja claro se isto é puramente uma função do releasato de plaquetas . Isto é apoiado por um estudo clínico no qual a terapia com aspirina parecia favorecer um equilíbrio antiangiogênico geral em mulheres com câncer de mama que receberam tamoxifen avaliado pela diminuição dos níveis plasmáticos VEGF e liberação mediada do receptor de trombina de TSP-1 e VEGF de plaquetas .

Coppinger et al. realizaram um estudo proteômico baseado em espectrometria de massa para explorar melhor a composição do releasato de plaquetas em função do tratamento com aspirina . Neste estudo, o tratamento das plaquetas humanas com aspirina de baixa dose (20 μM) após estimulação por colágeno, SFLLRN, ou ADP resultou em uma ampla diminuição da quantidade de proteína encontrada no releasato, embora a extensão desta redução tenha sido dependente do agonista utilizado. O tratamento com aspirina também resultou na diminuição dos níveis de fator de crescimento regulador (GRO), fator de crescimento derivado de plaquetas (PDGF), angiogenina, RANTES e oncostatina M (OSM) no releasato de plaquetas, particularmente após a estimulação com colágeno. Enquanto estas, e outras citocinas derivadas de plaquetas (por exemplo CXCL4 e CTGF ), são críticas para a regulação do reparo vascular, elas também desempenham um papel na condução da tumorigenese, angiogênese e metástase.

Definindo o acetylome da aspirina

Como dito acima, a aspirina é conhecida por acetilar uma grande variedade de alvos de proteínas intracelulares e extracelulares, particularmente nos grupos de amino cadeia lateral e N-terminal. Infelizmente, não tem havido estudos proteômicos abrangentes que abordem especificamente a questão de quais proteínas plaquetárias, além das enzimas COX, são acetiladas pela aspirina ou o papel biológico dessas acetilações não-canônicas. Nesta seção, consideraremos estudos proteômicos anteriores para identificar alvos não canônicos da acetilação mediada pela aspirina e tentar relacioná-los ao estado atual da proteômica plaquetária.

Existiram numerosos estudos proteômicos que tentaram definir o conjunto de proteínas acetiladas por concentrações fisiológicas de aspirina em várias linhas celulares. Bhat e colegas de trabalho identificaram 33 proteínas celulares acetiladas pela aspirina após enriquecimento com um anticorpo anti-acetil lisina . Análise subsequente por espectrometria de massa identificou a presença de enzimas acetiladas citoesqueléticas e metabólicas, incluindo glucose-6-fosfato desidrogenase (G6PD), lactato desidrogenase, enolase, piruvato quinase e transketolase embora apenas a G6PD tenha sido significativamente inibida pela acetilação mediada pela aspirina in vitro. Isto sugere que a aspirina pode bloquear o fluxo através da via pentose-fosfato, embora estudos adicionais sejam necessários para confirmar isto. Este grupo também mostrou que a aspirina acetilatos p53 que resulta no aumento da ligação do DNA, expressão do p21Cip e aumento da morte das células apoptóticas na presença de camptotecina. Embora estes efeitos tenham sido demonstrados em múltiplas linhas celulares tumorais, a ausência do p53 no proteoma plaquetário, bem como a falta de um genoma funcional nas plaquetas sugere que a acetilação do p53 terá um impacto mínimo na biologia plaquetária.

Outros avanços recentes na proteômica de alto rendimento, juntamente com sondas baseadas em atividade, levaram à identificação de centenas de acetilações putativas mediadas pela aspirina. Em uma abordagem, o grupo acetil de aspirina foi substituído por ácido pentinóico para gerar um derivado de aspirina contendo alquina (AspAlk) . Em contraste com a aspirina, a transferência de acetil por AspAlk resulta na incorporação de um alquino reativo azido-reativo em locais normalmente acetilados pela aspirina. Após a incubação do AspAlk com células vivas colorretal HCT-15, as proteínas que foram acetiladas pelo AspAlk foram etiquetadas com biotina através da cicatrização azido-alquídica catalisada pelo cobre (CuAAC) e isoladas pela extração da estreptavidina. Após análise por LC-MS, os autores conseguiram identificar 120 proteínas com enriquecimento significativo da acetilação de AspAlk em relação aos controles de DMSO. As classes de proteínas mais enriquecidas neste estudo foram aquelas envolvidas na síntese e dobramento de proteínas, proteínas citoesqueléticas e enzimas metabólicas. A acetilação do Histone também foi observada e confirmada bioquimicamente. Este trabalho foi estendido em um manuscrito recente de Shen, Lin e colegas de trabalho que utilizaram uma azida biotina ácido-lábica para facilitar a recuperação de proteínas modificadas por AspAlk após a conjugação de biotina e a extração de estreptavidina. Esta estratégia resultou na identificação de mais de 500 proteínas acetiladas. A análise da lista de alvos indicou uma acetilação significativa dentro da via mTOR que controla muitas funções celulares chave, incluindo a síntese de proteínas e a autofagia. Os autores validaram as observações proteômicas iniciais mostrando que o tratamento com aspirina tanto de células colorrectais HCT116 quanto de fibroblastos embrionários de camundongos reduziu a síntese de proteína nova e induziu a autofagia. A indução da autofagia pela aspirina é de particular interesse à luz de um estudo recente mostrando que a autofagia é essencial para a função plaquetária normal e é upregulada durante a estimulação plaquetária. Além disso, a maquinaria autofágica funcional é essencial para a actividade anti-coagulante plaquetária, como demonstrado por modelos de rato onde o Atg7 plaquetário é eliminado. Enquanto a relação funcional entre a acetilação mediada por aspirina e a indução autofágica plaquetária permanece pouco clara, a inibição da via de fosfato pentose (PPP) através do bloqueio de G6PD ou interrupção da respiração mitocondrial através da acetilação da desidrogenase malácea e/ou isocitrato desidrogenase pode aumentar a carga oxidativa intracelular, um conhecido gatilho para a autofagulação . Alternativamente, há ampla evidência de acetilação mediada por aspirina de chaperones, particularmente proteínas de choque térmico e isomerases de peptidil-prolil que podem prejudicar a dobra adequada de proteínas e desencadear a remoção autofágica de proteínas desdobradas.

Um outro estudo proteômico recente de Tatham e colegas de trabalho usaram aspirina marcada com 3H para identificar locais de acetilação mediada por aspirina em células de HeLa por espectrometria de massa . Nesta abordagem, o uso da aspirina tritiada resulta em um deslocamento de massa +3 Da em relação ao acetato normal e permite uma discriminação mais precisa da acetilação mediada pela aspirina versus a acetilação endógena. Esta abordagem revelou mais de 12.000 acetilações mediadas pela aspirina em mais de 3700 proteínas únicas. Curiosamente, muitas das proteínas que foram acetiladas pela aspirina também foram acetiladas na ausência de aspirina, sugerindo que a aspirina “amplifica” os sítios de acetilação de proteínas existentes. Os autores deste estudo também descobriram que na maioria dos casos, <1% do total de sítios disponíveis para acetilação de qualquer proteína em particular foram acetilados pela aspirina, implicando que a estequiometria da acetilação não específica pela aspirina pode ser insuficiente para produzir efeitos biológicos significativos sem bloqueio farmacológico das atividades endógenas da deacetilase.

Este estudo também mostrou uma acetilação significativa das proteínas histônicas, sendo que a maioria da acetilação mediada pela aspirina ocorre no núcleo histônico e não nas caudas terminais N. A acetilação do histone tem sido observada em múltiplos estudos proteômicos e é um pouco surpreendente dada a alta proporção de resíduos de lisina nucleofílica nas histonas que desempenham um papel significativo na ligação eletrostática do DNA. A acetilação do histone desempenha um papel crítico na ligação do ADN e é um mecanismo epigenético bem conhecido para regular a expressão genética. Embora as plaquetas sejam anucleadas, estudos transcriptômicos anteriores identificaram transcrições específicas da história em plaquetas, particularmente H2A, H2B, H3, e H4 . Embora a acetilação histonal por aspirina tenha sido demonstrada de forma convincente, é importante notar que a expressão histonal não foi confirmada nas plaquetas. Em vez disso, foi postulado que a presença de transcrições de histona nas plaquetas é um artefato de ciclagem de células aberrantes em megacariócitos que dão origem às plaquetas. Mais importante, o papel das histonas no controlo da expressão ao nível do ADN está ausente nas plaquetas anucleadas.

Efeitos da aspirina no metabolismo plaquetário

O metabolismo plaquetário é primariamente oxidativo em contraste com os neutrófilos que são primariamente glicolíticos . O bloqueio da glicólise anaeróbica não diminui o ATP nem inibe a função plaquetária. Foi demonstrado que a acetilação das enzimas do ciclo do ácido tricarboxílico (TCA) e dos componentes da cadeia de transporte de electrões (ETC) é um método comum de regulação particularmente para enzimas envolvidas no metabolismo, tais como a malato-desidrogenase no metabolismo do carbono , a regulação do metabolismo lipídico , e no ciclo da ureia para a desintoxicação da amónia . Segue-se então que a acetilação das enzimas do ciclo TCA e dos componentes ETC pode ter um efeito significativo na bioenergética plaquetária. Estudos proteômicos da acetilação por aspirina têm revelado consistentemente a acetilação mediada por aspirina da malato-desidrogenase, que regula a alternância entre a síntese de carboidratos e ácidos graxos, e da isocitrato desidrogenase, que é regulada nas mitocôndrias pela desacetilação através das proteínas da sirtuina (Sirt3 e Sirt5). A atividade da deacetilase da sirtuina está associada a várias enzimas TCA na matriz mitocondrial e acredita-se que regulam a regeneração antioxidante, a regulação do fluxo TCA e a anapleurose. Durante a preparação e impressão desta revisão, não temos conhecimento de estudos que abordem diretamente a extensão da acetilação mediada pela aspirina das enzimas metabólicas ou o efeito da aspirina no fluxo metabólico, as evidências proteômicas sugerem que este pode ser um importante efeito não canônico da aspirina na bioquímica plaquetária.

Efeitos da aspirina na localização plaquetária em tumores

Novas evidências estão surgindo de que as próprias plaquetas podem desempenhar um papel significativo na carcinogênese e mais especificamente no desenvolvimento de metástases. Em modelos metastáticos de camundongos onde células tumorais são injetadas diretamente na circulação, estratégias para reduzir a contagem de plaquetas circulantes têm se mostrado eficazes na redução da carga tumoral. Outros estudos em modelos metastáticos onde a fibrina solúvel e as células tumorais foram co-injetadas para aumentar o efeito de coagulação, mostraram aumento da incidência de metástases in vivo. Estes estudos foram apoiados por experiências in vitro onde a fibrina solúvel melhorou as interacções entre as plaquetas e as células tumorais em condições de cultura . Estes estudos suportam a hipótese de que a ativação da agregação plaquetária, além do aumento esperado da fibrina, aumenta a aderência plaquetária às células tumorais e facilita a disseminação metastática. Além da fibrina, estudos adicionais têm considerado o papel da trombina, da PAR-1 e do fator de coagulação VII (FVII), e sua associação com o aumento da viabilidade das células tumorais, crescimento e disseminação do câncer, aumento da malignidade tumoral e suporte metastático .

Além de modular a biologia das células tumorais na circulação sistêmica, as plaquetas também têm demonstrado um papel importante no crescimento das células tumorais. Em um estudo, foi demonstrado que a aspirina diminuiu significativamente o grau de proliferação de células tanto in vitro como in vivo do câncer de ovário. Este mesmo estudo também descobriu que a ativação plaquetária pode aumentar a proliferação e o crescimento de células tumorais após a co-incubação de células tumorais e plaquetas. A inibição dos receptores adesivos plaquetários incluindo GPIβα, GPIIβIIIα e P-selectina, no entanto, não diminuiu os efeitos proliferativos das plaquetas. Isto sugere que as proteínas secretadas por plaquetas e outros factores podem ter um papel na regulação do crescimento das células tumorais. Por exemplo, foi observado que a redução da TGF-β1 plaquetária diminuiu a proliferação de células cancerosas dos ovários expostas às plaquetas. Além disso, a aspirina também demonstrou prevenir a metástase do câncer colorretal através de um mecanismo COX-1 envolvendo TXA2 e PGE2 , sugerindo que plaquetas ativadas podem suportar a metástase através da produção de prostaglandinas dependentes de COX-1. Finalmente, um novo conjugado aspirina-fosfotidilcolina (Aspirin-PC) demonstrou interromper a transição epitelial-mesenquimatosa (EMT) através do VEGF e da libertação de tromboxano. Esta formulação também inibiu a proliferação celular e a angiogênese enquanto aumentava a apoptose em modelos de células cancerosas ovarianas e colorrectais .