Useimmissa ryhmissä sen jälkeen, kun uros on onnistuneesti lähestynyt naarasta ja kiinnittänyt sen, se työntää vasemman jalkaluunsa naaraan sukupuolielinten vasemmanpuoleiseen aukkoon ja oikean jalkaluunsa oikeaan aukkoon. Joillakin alkukantaisilla hämähäkeillä (esim. haplogynes, mygalomorphs) ja muutamilla muilla uros työntää molemmat pedipalpit samanaikaisesti naaraan sukuelinrakoon.
Naaraan sukuelinrako eli epigynum on kovettunut levy vatsan alapuolella gonoporen edessä. Kun siittiöt ovat siirtyneet epigynumiin, ne siirtyvät astioihin (spermathecae), jotka yhdistyvät munanjohtimiin. Munasolut hedelmöittyvät, kun ne kulkevat munanjohtimien läpi ja poistuvat gonoporeista.
Voimaa, joka aiheuttaa siittiöiden ruiskuttamisen uroksen pedipalpista naaraan astiaan, ei ole varmuudella selvitetty, mutta siihen saattaa liittyä kohonnut verenpaine, joka laajentaa pedipalppien kovien levyjen välissä olevaa pehmeää verisuonikudosta (hematodocha). Tämä saa sipulimaisen rakenteen, joka sisältää kanavan, kiertymään ja koukistumaan naaraan epigynumiin ja ruiskuttamaan siittiöitä ikään kuin ne puristettaisiin sipuliruiskusta.
Parittelu voi kestää joillakin lajeilla vain sekunteja, mutta toisilla lajeilla tunteja. Jotkut urokset lataavat pedipalpensa uudelleen ja parittelevat uudelleen saman naaraan kanssa. Parittelun jälkeen joidenkin lajien urokset levittävät epigynumin päälle eritteen, jota kutsutaan epigynaalitulpaksi, joka estää naarasta parittelemasta toista kertaa. Uroshämähäkit kuolevat yleensä pian parittelun jälkeen tai jopa sen aikana. Erään eurooppalaisen pallohämähäkkilajin naaras pureutuu uroksen vatsaan ja pitää siitä kiinni parittelun aikana. Vaikka jotkut naaraat syövät uroksen parittelun jälkeen, tämä käytäntö ei ole yleinen. Esimerkiksi mustan lesken (Latrodectus-suku) uros kuolee yleensä päivien kuluttua parittelusta, vaikka toisinaan se on parittelun jälkeen niin heikko, että naaras ottaa sen kiinni ja syö sen. Kaakkois-Aasian ja Tyynenmeren lounaisosan uroshämähäkkien (Nephilengys malabarensis) uskotaan välttelevän seksuaalista kannibalismia etäkopulaatiolla, jossa uroksen paritteluelin irtoaa parittelun aikana ja jää naaraaseen, mikä mahdollistaa pitkittyneen siittiöiden siirron. Joidenkin lajien naaraat parittelevat vain kerran, kun taas toiset lajit parittelevat useita kertoja saman uroksen kanssa tai parittelevat useiden eri urosten kanssa. Pitkäikäisten mygalomorfisten hämähäkkien naaraiden on pariuduttava toistuvasti, koska ne irrottavat nahkansa kerran tai kaksi kertaa vuodessa, mukaan lukien spermatekan limakalvon.
