Bacillus megateriummal bevont tápok hatása a Songpu tükörponty Cyprinus specularis Songpu növekedésére, emésztőenzim-aktivitására és bélrendszeri mikrobiális sokféleségére

Abstract

A jelen vizsgálatot a Bacillus megateriummal bevont tápok növekedési teljesítményre gyakorolt hatásának értékelésére végeztük, emésztőenzimek és a bél mikrobiális sokféleségére Songpu tükörponty (Cyprinus specularis Songpu) esetében. A halakat kézzel etették két táppal (egy kontrolltáppal és egy B. megateriummal bevont táppal) naponta háromszor a látszólagos telítettségig 56 napon keresztül. A kontrollcsoporttal összehasonlítva a B. megateriummal bevont táppal való kiegészítés fokozta a halak növekedését és jelentősen csökkentette a takarmányátalakítási arányt (). Az előbél amiláz és lipáz aktivitása a kezelt csoportban szignifikánsan magasabb volt, mint a kontrollcsoportban (). Az előbél-, középbél- és hátsóbél-proteázok aktivitása a kezelt csoportban mind magasabb volt, mint a kontrollcsoportban (). A mikrobióta 16S rDNS génjeinek nagy áteresztőképességű szekvenálással történő szekvenálásának eredményei azt mutatták, hogy a Songpu tükörponty növekedésével együtt nőtt a bél mikroflóra diverzitása és abundanciája. A B. megateriummal bevont táppal etetett Songpu tükörpontyoknál a bélbaktériumok Bacillus és Lactococcus aránya nemzetségszinten megnőtt, és mindkettő szignifikánsan magasabb volt, mint a kontrollcsoporté (). Ezek az eredmények tehát arra utalnak, hogy a B. megaterium étrendi alkalmazása javíthatja a Songpu tükörponty növekedését és emésztőenzim-aktivitását, valamint gazdagíthatja a fő bélflóra hasznos nemzetségösszetételét.

1. Bevezetés

A halak, mint az állati fehérjék egyik fő táplálékforrása, nagyon fontos szerepet játszanak az emberi táplálkozás szerkezetében. Az utóbbi években azonban a vízi termékek biztonsága a hormonok, antibiotikumok és túlzott mikroorganizmusok biztonságával kapcsolatos aggodalmak miatt a vízi termékek fejlesztését akadályozó egyik legnagyobb tényezővé vált . A nagy sűrűségű intenzív tenyésztés gyors fejlődésével az akvakultúra vízi környezete napról napra romlik, ami betegségkitörésekhez, sőt a tenyésztett állatok tömeges elhullásához vezet. Sürgősen környezetbarát és biztonságos alternatívákat kell találni a tenyésztett állatok egészséges növekedésének biztosítására .

Az antibiotikumok korszaka utáni új takarmányadalékként a probiotikumokat a takarmány-antibiotikumok fontos helyettesítőinek tekintik . Tanulmányok kimutatták, hogy a probiotikumok használata nemcsak a víziállatok növekedését és túlélési arányának javítását segítheti elő, hanem csökkentheti a víziállatok betegségeinek előfordulását is . A bacillus egy szaprofita gram-pozitív baktérium, amely gyakran megtalálható a tenyésztési környezetben . A Bacillus kutatása és alkalmazása az akvakultúra területén nagy figyelmet keltett. A probiotikumok első alkalmazása az akvakultúrában a vízben lévő baktériumpopuláció kiegyensúlyozásával történt, és jó eredményeket ért el . Egyes tanulmányok kimutatták, hogy a Bacillus subtilis hozzáadása a takarmányhoz nemcsak a víziállatok növekedését segítheti elő, és javíthatja emésztőenzimjeik aktivitását és nem specifikus immunitásukat, hanem javíthatja bélflórájuk szerkezetét is. A 20. század közepén a kínai tudósok elkezdték tanulmányozni a Bacillus megateriumot, főként a törzsek szűrésére összpontosítva, különösen a szerves anyagok lebontására való képességükre, a nitrogén anyagcseréjükre és az akvakultúra szennyvízkezelésében probiotikumként való alkalmazásukra .

A közönséges ponty (Cyprinus carpio) a legkiterjedtebben tenyésztett édesvízi halfaj Kínában, és a közönséges ponty termelése 2018-ban 2.962.218 t volt . A közönséges ponty egyik fajtája, a Songpu tükörponty (Cyprinus specularis Songpu) a termelés egyre nagyobb hányadát teszi ki a viszonylag gyorsabb növekedés, a jobb betegségekkel szembeni ellenálló képesség, a magasabb húsátalakítási arány és a testfelületen lévő pikkelyek szinte teljes hiánya miatt . A nagy sűrűségű tenyésztés elterjedésével és előmozdításával, a növekvő etetési gyakorisággal és a vízszennyezéssel azonban egyre súlyosabbá váltak az élelmiszerbiztonsági és minőségi problémák.

A tápanyagok a víziállatok ellenálló képességét befolyásoló legfontosabb és legkönnyebben szabályozható tényezők közé tartoznak. Az élelmiszermikrobiológia olyan mikroorganizmusokat foglal magában, amelyek mind jótékony, mind káros hatással vannak az élelmiszerek minőségére és biztonságára, és ezért a közegészségügy szempontjából aggodalomra adhatnak okot. Ebben a tanulmányban a B. megateriummal bevont tápok Songpu tükörponty növekedésére, emésztőenzim-aktivitására és bélmikrobiális diverzitására gyakorolt hatásának értékelését tűztük ki célul, és elméleti alapot kívántunk nyújtani az egészséges és ökológiai haltenyésztés gyakorlatához.

2. Anyagok és módszerek

2.1. A B. megateriummal bevont tápok hatása a Songpu tükörponty növekedésére, emésztőenzim-aktivitására és bélmikrobiális diverzitására. Táplálékkészítés

B. megateriumot állítottunk elő laboratóriumunkban . A B. megaterium tartalma . A kereskedelmi takarmányt a Zhejiang AIPHA Feed Co., Ltd., Kínától vásároltuk. A takarmánytermék összetétel elemzésének garantált értékeit az 1. táblázat tartalmazza. A B. megaterium fermentációs levesét egyenletesen permeteztük a kereskedelmi anyag felületére 100 ml/kg mennyiségben, majd a permetezett takarmányt 1 órára hűvös helyre helyeztük, majd a kísérleti csoport takarmányaként használtuk. A kontrollcsoport a változatlan kereskedelmi takarmányt kapta.

2. táblázat. Takarmányozási kísérlet

Songpu tükörpontyot (Cyprinus specularis Songpu) (testtömeg ) a Heilongjiang folyó halászati kutatóintézetének Hulan kísérleti állomásáról (Heilongjiang tartomány, Kína) (45,97°N, 126,63°E) nyertünk. A halakat 14 napig akklimatizálták a laboratóriumi körülményekhez, és a kísérletet megelőzően hozzászoktatták őket a kísérleti kontrolltakarmányhoz. Ezután 90 egészséges Songpu tükörpontyot választottak ki, és véletlenszerűen két csoportra osztották őket (kontrollcsoport és kísérleti csoport). Minden kezelést három példányban végeztünk, és minden ismétlésben 15 hal volt. A kontrollcsoportot kereskedelmi takarmányokkal etették. A kezelt csoportot B. megateriummal bevont kereskedelmi takarmányt kapott. A napi etetési mennyiség a Songpu tükörponty testtömegének 3%-a volt, naponta háromszor, 08:00, 12:00 és 19:00 órakor. A teljes kísérleti időszak 56 nap volt. A kísérleti időszak alatt a laboratóriumi vizet hetente a vízmennyiség 1/3-ával cserélték ki. A vízminőséget a kísérleti időszak alatt naponta mértük (YSI professional plus, Ohio State, USA), a víz hőmérséklete 18 és 25 °C között mozgott, és egy légkompresszorral naponta 24 órán keresztül oxigént adagoltunk. A halakat az etetési kísérlet kezdetén és végén is megmértük.

2.3. Mintavétel

A takarmányozási kísérlet előtt tíz halat véletlenszerűen kivettünk az ideiglenes tenyésztőmedencéből, és megmértük a kezdeti testtömegüket. Ezután a béltraktust begyűjtötték a kezdeti bélflóra méréséhez (kezdeti csoport). Az 56 napos etetési kísérlet végén, körülbelül 24 órával az utolsó etetés után minden halat 75 mg/l koncentrációban vízben hígított MS-222-vel altattak el. Ezeket a halakat megszámoltuk és megmértük a súlygyarapodás (WGR), a fajlagos növekedési ráta (SGR) és a takarmányátalakítási arány (FCR, 2. táblázat) meghatározásához .

Az összes hal végső súlyának megállapítása után minden tartályból véletlenszerűen kiválasztottunk öt halat, és gyors boncolás céljából jégtányérba helyeztük őket. A szövetmintákat, beleértve az előbél, a középbél és a hátsó bél szövetmintáit, aszeptikus ollóval gyűjtöttük, aszeptikus fiziológiás sóoldattal mostuk, megmértük, majd aszeptikus fiziológiás sóoldattal (1 : 4) homogenátot készítettünk belőlük. Minden mintát azonnal -80 °C-on, fagyasztóban tároltunk az emésztőenzimek meghatározásához. Minden tartályból véletlenszerűen további öt halból is mintát vettek. A halak felületét 75%-os alkohollal fertőtlenítettük, mielőtt a halakat egy biotisztító helyiségbe vittük. További fertőtlenítés után a hasüreget felnyitották, a bél külső részét 75%-os alkohollal letörölték, majd négyszer steril vízzel lemosták, majd a béltraktust összegyűjtötték a végső bélflóra értékeléséhez.

2.4. Emésztőenzimek meghatározása

Az immunitási indexek mérése előtt az összevont előbél, középbél és hátsó bél összevont részét kézzel homogenizáltuk üveg homogenizátorban 0,86% NaCl-lal (/), hogy 10%-os homogenátumot kapjunk. Centrifugálás (4000 rpm, 10 perc) után 4°C-on a felülúszót, amely elsősorban nyers enzimfolyadékból állt, nyertük. Az amiláz, proteáz és lipáz aktivitását az előbélben, a középbélben és a hátsó bélben spektrofotometriásan elemeztük diagnosztikai reagens-készletek (Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Kína) segítségével.

2.5. 16S rRNS génamplifikáció és Illumina szekvenálás

A mikrobiális DNS-t a bélmintákból az E.Z.N.A.® Soil DNA Kit (Omega Bio-Tek, Norcross, GA, USA) segítségével vontuk ki a gyártó protokollja szerint. A DNS végső koncentrációját és tisztaságát NanoDrop 2000 UV-vis spektrofotométerrel (Thermo Scientific, Wilmington, USA) határoztuk meg, a DNS minőségét pedig 1%-os agaróz gélelektroforézissel. A baktériumok 16S rRNS génjeinek V4-V5 hipervariábilis régióit az 515F (5-GTGCCCCAGCMGCCGCCGCGG-3) és 907R (5-CCGTCAATTCMTTTRTRAGTTT-3) primerekkel amplifikáltuk termocycler PCR rendszer (GeneAmp 9700, ABI, USA) segítségével. A PCR-eket a következő programmal végeztük: Ciklusok: 3 perc denaturálás 95°C-on, 27 ciklus, 30 másodperc 95°C-on, 30 másodperc lágyítás 55°C-on, 45 másodperc elongáció 72°C-on, majd végső hosszabbítás 72°C-on 10 percig. Az így kapott PCR-termékeket 2%-os agaróz gélből extraháltuk, majd AxyPrep DNS gél extrakciós kit (Axygen Biosciences, Union City, CA, USA) segítségével tovább tisztítottuk, és a gyártó protokollja szerint QuantiFluor™-ST (Promega, USA) segítségével számszerűsítettük. A tisztított amplikonokat ekvimoláris mennyiségben összevontuk és párosított végű szekvenálással () Illumina MiSeq platformon (Illumina, San Diego, USA) a Majorbio Bio-Pharm Technology Co., Ltd. standard protokolljai szerint szekvenáltuk. (Sanghaj, Kína) .

2.6. Statisztikai elemzés

Az operatív rendszertani egységeket (OTU-k) 97%-os hasonlósági határértékkel klasztereztük az UPARSE (7.1 verzió, http://drive5.com/uparse/) segítségével egy új “mohó” algoritmussal, amely egyszerre végzi a kiméra-szűrést és az OTU-k klaszterezését. Az egyes 16S rRNS génszekvenciák taxonómiáját az RDP Classifier algoritmussal (http://rdp.cme.msu.edu/) elemeztük a SILVA 16S rRNS-adatbázissal szemben, 70%-os megbízhatósági küszöböt alkalmazva. A közösség gazdagságának azonosítására a Chao és az ACE becslő indexeket választottuk, a közösség diverzitásának azonosítására pedig a Shannon és a Simpson indexeket használtuk . Mindezen indexeket a mintáinkban a QIIME (1.7.0 verzió) segítségével számoltuk ki, és az R szoftverrel (2.15.3 verzió) készítettük elő megjelenítésre. A statisztikai elemzéseket az SPSS 20.0 statisztikai szoftvercsomaggal (SPSS, Chicago, IL, USA) végeztük. Az adatokat három ismétlés értékeként fejeztük ki. Az adatokat egyirányú ANOVA-nak vetettük alá, és ha különbségeket találtunk, az átlagokat Duncan többszörös összehasonlító tesztjével rangsoroltuk. A különbségeket .

3. eredmények

3.1. szignifikánsnak tekintettük. A B. megateriummal bevont táp hatása a halak növekedésére

Amint a 2. táblázat mutatja, a kezelt csoport súlygyarapodási rátája és fajlagos növekedési rátája (71,03%, 0,42% napi-1) szignifikánsan nőtt a kontrollcsoportéhoz képest (52,75%, 0,33% napi-1, ), és a kezelt csoport takarmányátalakítási aránya (1,28) jelentősen alacsonyabb volt, mint a kontrollcsoporté (2,23, ). A takarmányozási kísérlet 56 napja alatt nem észleltek elhullást.

3.2. A B. megateriummal bevont táp hatása az emésztőenzimek aktivitására

A B. megateriummal bevont táp hatása az emésztőenzimek aktivitására a 3. táblázatban látható. Az előbél amiláz aktivitása a kezelt csoportban szignifikánsan magasabb volt, mint a kontrollcsoportban (). A középbél és a hátsó bél amiláz aktivitása a kezelt csoportban szignifikánsan magasabb volt, mint a kontrollcsoportban, de nem volt szignifikáns különbség (). Az előbél, a középbél és a hátsó bél proteáz aktivitása a kezelési csoportban magasabb volt, mint a kontrollcsoporté, de nem volt szignifikáns különbség (). Az előbél lipáz aktivitása a kezelési csoportban szignifikánsan magasabb volt, mint a kontrollcsoportban (). A középbél és a hátsó bél lipáz aktivitása a kezelt csoportban lényegében megegyezett a kontrollcsoportéval, és nem voltak szignifikáns különbségek ().

3.3. táblázat. A B. megateriummal bevont táp hatása a bél mikrobiális sokféleségére és gazdagságára

A Songpu tükörponty bél mikrobiális sokféleségét nagy áteresztőképességű szekvenálással határoztuk meg. A kezdeti csoportmintából kimutatott OTU-k átlagos száma 63 volt. Az 56 nap elteltével a kontroll- és a kezelési csoportban kimutatott OTU-k átlagos száma 114, illetve 196 volt. Az összes minta lefedettségi indexe 0,97 fölött volt, ami azt jelzi, hogy magas volt a kimutatási arány. Amint a 4. táblázatban látható, a Songpu tükörponty bélflórájának gazdagságát tükröző Chao- és ACE-indexek 56 nap után a kezelési csoportban szignifikánsan magasabbak voltak, mint a kontroll- és a kezdeti csoportban (). A bélközösség diverzitásának Shannon-indexe a kezelési csoportban szignifikánsan magasabb volt, mint a kontrollcsoportban (). A bélközösség diverzitásának Simpson-indexe a kezelési csoportban szignifikánsan alacsonyabb volt, mint a kontrollcsoportban (). A fenti négy index esetében nem volt szignifikáns különbség a kontroll- és a kiindulási csoport között ().

3.4. táblázat. A B. megateriummal bevont étrend hatása a Songpu tükörponty bélrendszerének fő mikrobiótájának összetételére és változásaira

Az 1. ábrán bemutatott statisztikákhoz a bélrendszeri mikrobák 1%-nál nagyobb törzs szintű gazdagságát tekintettük fő mikroflórának. A kezdeti csoport bélrendszerében a domináns törzs a kísérlet megkezdése előtt túlnyomórészt Fusobacteria (86,36%) és Bacteroidetes (8,60%) volt. Az 56 napos takarmányozási kísérletet követően a fő bélflóra száma minden csoportban növekedett. A kontrollcsoportban a domináns fajai a Fusobacteria (86,36%), a Bacteroidetes (14,4%), a Firmicutes (2,42%) és a Proteobacteria (1,37%) voltak. A kezelt csoportban a domináns fajai a Firmicutes (69,15%), Proteobacteria (23,8%), Bacteroidetes (4,65%) és Actinobacteria (1,43%) voltak. Az 5. táblázatban látható statisztikai számításokhoz a 0,5%-nál nagyobb bélmikrobiális mikrobagazdagságot tekintettük fő mikroflórának a nemzetségek szintjén. A bélrendszeri fő mikroorganizmusok közül csak 5 nemzetség volt a kiindulási csoportban. Az 56 napos takarmányozási kísérletet követően a fő bélrendszeri mikroorganizmusok száma 11 nemzetségre nőtt a kezelési csoportban. A Songpu tükörponty bélrendszerében a kezdeti csoportban a Cetobacterium volt a leggyakoribb mikroorganizmus. Az 56 napos etetési kísérlet után a kontrollcsoportban a legelterjedtebb mikroorganizmus még mindig a Cetobacterium volt. A kontrollcsoportban a 11 domináns nemzetség a Bacillus, Lactococcus, Pseudomonas, Stenotrophomonas, Psychrobacter, Brochothrix, Myroides, Arthrobacter, Flavobacterium, Comamonadaceae_unclassified és Yersinia volt. A B. megateriummal bevont táppal etetett Songpu tükörpontyoknál a bélrendszeri Bacillus és Lactococcus aránya nemzetségszinten megnőtt, és mindkettő szignifikánsan magasabb volt, mint a kontrollcsoporté ().

1. ábra

Bélrendszeri mikrobiális összetétel törzsszinten a B. megateriummal 56 napig etették.

Genus Kezelések Inicial Control B. megaterium Cetobacterium – Lactococcus – – – Bacillus – – Enterobacteriaceae_nem osztályozott – – – – Bacteroides – Comamonadaceae_unclassified – Yersinia – Pseudomonas – – Pseudoxanthomonas – – – Fusobacteriales_unclassified – Stenotrophomonas – Psychrobacter – – Leucobacter – – – – Brochothrix – – – Myroides – Barnesiella – Rhodobacter – – – Arenimonas – – Clostridium – – – Arthrobacter – – Flavobacterium – Más

Jegyzetek: –

5. táblázat

A bélmikroflóra fő nemzetségének százalékos aránya Songpu tükörpontyokban, amelyeket B. megateriummal 56 napig etették.

4. Megbeszélés

Az olyan probiotikumokat, mint a bacilusok, széles körben használják az akvakultúrában. Egyes vizsgálatok kimutatták, hogy a Bacillus spp. különböző törzseinek hozzáadása a lárvák takarmányához jó eredményeket ért el, és jó elősegítő hatással van a hallárvák növekedésére . A baktériumok (CA2 törzs) takarmánykiegészítőként történő hozzáadása a Crassostrea gigas osztriga xenikus lárvakultúráihoz következetesen fokozta a lárvák növekedését az év különböző időszakaiban . A mikrobióta probiotikumokkal történő manipulációját az akvakultúrában a patogén baktériumok ellenőrzése vagy gátlása, valamint a növekedési teljesítmény és az emésztőenzimek aktivitásának javítása érdekében méltó gyakorlatként jelentették be . A kezeletlen kontrollcsoporthoz képest a két probiotikus törzs keverékével etetett garnélarákok végső tömege és súlygyarapodása szignifikánsan nagyobb volt a két probiotikus törzsből álló tápok keverékével etetett garnélarákoknál . Ebben a vizsgálatban azt találták, hogy a B. megateriummal bevont táp növelte a súlygyarapodási arányt és a fajlagos növekedési arányt, és csökkentette a takarmányátalakítási arányt, ami azt jelzi, hogy a B. megateriummal bevont tápok elősegíthetik a Songpu tükörponty növekedését. Hasonló eredményeket találtak a Clarias sp. harcsák esetében is, ahol a B. megaterium PTB 1.4 hozzáadása a takarmányhoz jelentősen javította a növekedési rátát. Hasonló eredményeket találtak a Penaeus monodon esetében is, ahol a Bacillus cereus hozzáadása után magasabb FCR és SGR értékeket értek el .

A probiotikus baktériumok képesek emésztőenzimek termelésére, amelyek segítik a halakat a takarmány tápanyagainak felhasználásában és emésztésében . A B. megaterium hozzáadása a növényi fehérjetápokhoz elősegítheti a bélmorfológia fejlődését és növelheti az emésztőenzimek aktivitását . A probiotikumok vizsgálata a közönséges ponty (Cyprinus carpio) esetében a növekedési teljesítmény és az emésztőenzim-aktivitás alapján azt mutatta, hogy az összes probiotikus kezelési csoport átlagos emésztőenzim-aktivitása jelentősen különbözött a kontrollétól . Ebben a vizsgálatban a B. megateriummal bevont táp pozitív és jelentős hatást gyakorolt az emésztőenzim-aktivitásra, különösen az amiláz és a proteáz aktivitására az előbélben, a középbélben és a hátsó bélben. Hasonló eredményeket találtak a tilápiák esetében is, amelyek javulást mutattak a táplálékemésztésben és a növekedésben, miután Bacillus NP5-t adtak a takarmányukhoz . A probiotikumokat tartalmazó táplálékkal elért magasabb szintű enzimaktivitás javította a fehérje, a keményítő, a zsír és a cellulóz emésztését, ami viszont magyarázhatja a probiotikummal kiegészített táplálékkal megfigyelt jobb növekedést . Az emésztőenzimek segítik a halakat a takarmányban lévő tápanyagok lebontásában és megemésztésében, megkönnyítve a halak számára a takarmányban lévő tápanyagok felszívódását .

A nagy áteresztőképességű szekvenálásban elért fejlődés lehetővé tette a metagenomikai minták kiterjedt katalógusát, betekintést nyújtva a legkülönbözőbb forrásokból, többek között az óceánból, a talajból és az emberi szervezetből származó mikrobafajok sokféleségébe. Ezek a vizsgálatok mind a 16S rRNS gén szekvenálást használják a filogenetikai kapcsolatok meghatározására, mind az átfogóbb shotgun szekvenálást a részletes faj- és génösszetétel előrejelzésére . A gazdagsági index és a diverzitási index fontos mutatók a mintákban lévő mikroorganizmusok sokféleségének és összetettségének kimutatására . Ebben a vizsgálatban a Songpu tükörponty növekedésével a bél mikrobiális diverzitása és gazdagsága nőtt, és a Chao és ACE indexek, amelyek tükrözik a Songpu tükörponty bél mikroflórájának gazdagságát, szignifikánsan magasabbak voltak a kezelt csoportban, mint a kontrollcsoportban. Ezenkívül a bélközösség diverzitásának Shannon-indexe a kezelt csoportban szignifikánsan magasabb volt, mint a kontrollcsoportban. Hasonlóképpen, az eredmények azt is kimutatták, hogy a bél mikroflóra szerkezete megváltozott, amikor a fiatal tompaorrú keszegeket különböző Bacillus subtilis-szintekkel kiegészített táplálékkal etették. A probiotikumok hozzáadása a takarmányhoz szintén megváltoztathatja az eredeti mikroflóra számát és szerkezetét a Litopenaeus vannamei béltraktusában, és elősegítheti a Litopenaeus vannamei béltraktusában lévő mikrobiális közösségek közötti komplex kölcsönhatásokat .

Ebben a vizsgálatban a B. megateriummal bevont táppal etetett Songpu tükörpontyoknál a bélbacillus és a Lactococcus megnövekedett arányát mutatták nemzetségszinten, amelyek mindkettő jelentősen magasabb volt, mint a kontrollcsoportban. Az eredmények azt is jelezték, hogy a Songpu tükörponty bélrendszerében a fő mikrobióta összetétele és aránya megváltoztatható a B. megateriummal bevont tápokkal. Összefoglalva, a B. megateriummal bevont tápok használata jelentősen fokozhatja a halak növekedését és csökkentheti a takarmányátalakítási arányt, javíthatja az emésztőenzimek aktivitását, és gazdagíthatja a fő bélmikroflóra hasznos nemzetségösszetételét.

Adatok elérhetősége

A cikk minden adatot tartalmaz, és nincs több feltöltendő adat.

Érdekütközések

A szerzők kijelentik, hogy nincs nyilvánosságra hozandó összeférhetetlenségük.

Köszönet

A tanulmányt a Központi szintű nonprofit tudományos kutatóintézetek speciális alapjai (no. HSY202005M), a Heilongjiang tartomány Természettudományi Alapítványa (sz. QC2018038), a Kínai Halászati Tudományos Akadémia Központi Közérdekű Tudományos Intézményi Alapkutatási Alapja (sz. 2017HY-ZD0507, 2019XT0502 és 2020TD56), a Kínai Nemzeti Kulcsfontosságú K&D Program (sz. 2019YFD0900302), valamint a Mezőgazdasági és Vidékügyi Minisztérium édesvízi vízi biotechnológia és tenyésztés kulcsfontosságú laboratóriuma, Heilongjiang Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences (no. FBB2017-04).