Développement d’une méthode HPLC-MS/MS pour déterminer 11 composés bioactifs dans la pilule Tongmai Yangxin et application à une étude pharmacocinétique chez le rat

Abstract

Une méthode HPLC-MS/MS sensible et fiable a été développée et validée pour la détermination simultanée de onze composés bioactifs (rhéine, émodine, glycoside de stilbène, liquiritine, ononine, verbascoside, acide gallique, schisandrine, liquiritigénine, acide glycyrrhizique et isoliquiritigénine) dans le plasma de rat après administration orale de pilule Tongmai Yangxin. Les échantillons de plasma collectés ont été préparés par extraction liquide-liquide avec de l’acétate d’éthyle après acidification. Onze composés ont été séparés sur une colonne CORTECS™ C18 avec des phases mobiles composées d’acide formique à 0,1 % dans de l’eau désionisée et d’acétonitrile. Le débit était de 0,3 mL/min. La détection a été réalisée sur un système de masse en tandem avec une source d’ionisation par électronébulisation (ESI) en ionisation positive et négative en utilisant le mode de surveillance des réactions multiples (MRM). Les courbes d’étalonnage étaient linéaires sur la plage de 8 à 2000 ng/mL pour l’acide glycyrrhizique ; 4 à 1000 ng/mL pour la liquiritine ; 0,8 à 200 ng/mL pour l’émodine, l’acide gallique, l’ononine, la schisandrine et le glycoside de stilbène ; 0,4 à 100 ng/mL pour l’isoliquiritigénine, la liquiritigénine, la rhéine et le verbascoside, respectivement. La précision intra- et inter-journalière des analytes était inférieure à 9,3 % et 8,5 %. La précision intra- et inter-journalière était comprise entre -14,0 % et 10,3 % et entre -6,5 % et 9,6 %. Parallèlement, la récupération par extraction des analytes dans les échantillons de plasma était comprise entre 85,2 % et 109,1 % et l’effet de matrice entre 89,2 % et 113,4 %. La méthode développée a été appliquée avec succès à la pharmacocinétique de onze composés bioactifs dans le plasma de rat après l’administration orale de la prescription de pilule Tongmai Yangxin.

1. Introduction

La médecine traditionnelle chinoise (MTC) est un précieux trésor de la nature. Les MTC ont été utilisés en clinique depuis des milliers d’années et attirent des attentions croissantes en raison du traitement de diverses maladies avec succès et avec un minimum d’effets secondaires . La prescription de la MTC, la forme la plus couramment utilisée dans la médication clinique, comporte plusieurs composantes et plusieurs cibles. Les multicomposants et les multicibles sont la supériorité et la caractéristique des actions pharmacologiques de la MTC .

La pilule Tongmai Yangxin (TMYX) est un médicament traditionnel chinois breveté documenté dans la pharmacopée chinoise. La prescription a été développée à partir d’une paire d’herbes bien connue « GuiZhi-GanCao » documentée dans « Shang-Han-Lun » par Zhongjing Zhang dans la dynastie Han orientale. La prescription se compose de onze herbes dont Radix rehmanniae, Caulis spatholobi, Radix glycyrrhizae, Ramulus cinnamomi, Radix ophiopogonis, Radix polygoni multiflori preparata, Asini corii colla, Fructus schisandrae, Radix codonopsis, Capapax et Plastrum testudinis, et Fructus jujubae. Le TMYX est utilisé depuis plusieurs décennies pour traiter les maladies coronariennes, l’arythmie, les douleurs thoraciques et l’angine de poitrine. Des études pharmacologiques modernes montrent que le TMYX a un effet significatif sur les maladies cardiaques. Quatre composés flavonoïdes actifs (glyasperine A, glycycoumarine, licorisoflavan A et licoisoflavone A) du TMYX se sont avérés avoir une activité biologique satisfaisante et promouvoir la prolifération et l’angiogenèse des cellules endothéliales de la veine ombilicale humaine chez le poisson zèbre . Parallèlement, Liu et al. ont signalé que cinq fractions du TMYX exerçaient une activité contre la transition épithéliale-mésenchymateuse. Les résultats de Tao ont indiqué que six ingrédients actifs avec des valeurs R élevées (gomisine D, schisandrine, acide glycyrrhizique, glycoside de stilbène, formononétine et ononine) exercent des effets anti-inflammatoires de manière dose-dépendante .

Les effets pharmacologiques du TMYX sont basés sur la composition chimique diverse. Chen a rapporté que 80 composés ont été identifiés ou supposés en utilisant la HPLC-MS, y compris 23 flavones et leurs glucuronides, 6 glycosides d’alcool phénéthylique, 20 saponines triterpéniques, 15 lignanes et 18 autres composés . Fan a caractérisé 40 composants bioactifs absorbés après administration orale de TMYX dans le sérum de rat par UPLC/Q-TOF-MS . Les 40 composants comprennent 2 de Radix rehmanniae, 10 de Radix codonopsis, 2 de Radix ophiopogonis, 2 de Ramulus cinnamomi, 19 de Radix glycyrrhizae, 2 de Radix polygoni multiflori preparata, 5 de Caulis spatholobi, 1 de Fructus jujubae, et 1 de Fructus schisandrae, dont certains se chevauchent. La plupart des ingrédients exercent des effets anti-inflammatoires et antioxydants, et exercent en outre l’effet protecteur cardiovasculaire. L’équipe détermine également les concentrations de liquiritine, de liquiritigénine, d’isoliquiritigénine, d’acide glycyrrhizique et d’acide glycyrrhétinique dans le plasma de rat après administration orale de Radix glycyrrhizae ou de la combinaison de Radix glycyrrhizae et de Ramulus cinnamomi par HPLC-UV. Cependant, aucune publication ne rapporte l’étude pharmacocinétique du TMYX.

La pharmacocinétique (PK) des MTC est une branche de la pharmacologie des MTC. La PK des MTC se concentre sur les études quantitatives des lois de l’absorption, de la distribution, du métabolisme et de l’excrétion des médicaments dans un organisme vivant. L’étude de la pharmacocinétique de plusieurs composants d’une prescription de MTC est l’un des aspects importants de la recherche sur la modernisation de la MTC. Les données pharmacocinétiques permettent d’élucider la base de la substance et de révéler la connotation scientifique des MTC. Elles jouent également un rôle important dans la création de nouveaux médicaments chinois, l’amélioration des formes de dosage et le mécanisme de formulation. Dans la présente étude, une méthode HPLC-MS/MS fiable et sensible a d’abord été développée et appliquée à l’étude pharmacocinétique de 11 composants bioactifs, dont la rhéine, l’émodine, le glycoside de stilbène, la liquiritine, l’ononine, le verbascoside, l’acide gallique, la schisandrine, la liquiritigénine, l’acide glycyrrhizique et l’isoliquiritigénine, chez des rats après administration orale de TMYX. Les caractéristiques pharmacocinétiques des principaux composants chimiques du TMYX chez les rats ont été révélées, ce qui fournirait une base théorique pour l’utilisation du TMYX en clinique.

2. Expérimental

2.1. Produits chimiques, réactifs et matériaux

Le méthanol (pureté chromatographique) et l’acétonitrile (pureté chromatographique) ont été achetés auprès de Merck Co., Ltd. L’acide formique (pureté chromatographique) a été obtenu auprès de ROE Co., Ltd. L’eau ultra-pure a été préparée avec un système de purification d’eau Milli-Q (Millipore, Milford, MA, USA). La rhéine, l’émodine, le glycoside de stilbène, la liquiritine, l’ononine, le verbascoside, l’acide gallique, la schisandrine, la liquiritigénine, l’acide glycyrrhizique, l’isoliquiritigénine et l’icariine ont été achetés auprès de Chengdu Must Bio-Technology Co, Ltd. (Chengdu, Chine). Les TMYX ont été fournis par Tianjin Zhongxin Pharmaceutical Group Co., Ltd.

2.2. Conditions chromatographiques et de spectrométrie de masse

Le système HPLC-MS/MS est constitué d’une chromatographie liquide haute performance Agilent 1200 couplée à un spectromètre de masse triple quadripôle Aglient 6430 series avec une source d’ionisation électrospray (ESI). La séparation chromatographique a été réalisée sur une colonne CORTECS C18 (4,6 mm × 150 mm, 2,7 μm), et la température de la colonne a été maintenue à 30°C. Des phases mobiles composées d’acide formique à 0,1 % dans l’eau (A) et d’acétonitrile (B) ont été utilisées dans la méthode d’élution par gradient suivante : 0-10 min, 10 %-85 % B ; 10-13 min, 85 %-95 % B ; 13-19 min, 95 %-95 % B. Le débit a été fixé à 0,3 mL/min, et le volume d’injection était de 10 μL. Toutes les données ont été analysées par le logiciel de la station de travail Mass Hunter (Agilent Technologies, USA).

Le spectromètre de masse a été réalisé en mode de surveillance à réactions multiples (MRM) par ionisation positive et négative. Les paramètres de la source étaient les suivants : la tension capillaire fixée à 300 V pour le mode d’ionisation positive et à -300 V pour le mode d’ionisation négative, la température du gaz de séchage était de 320°C, le débit était de 11 L/min et la pression du gaz de nébulisation était de 30 psi. Le précurseur et la production des ingrédients et les paramètres MRM ont été affichés dans le tableau 1.

2.3. Préparation de l’extrait de TMYX

L’extrait de TMYX a été préparé comme suit : Un total de 100 g de poudre de TMYX a été pesé avec précision et extrait deux fois sous reflux thermique par quatre fois des quantités d’éthanol à 60% (v/v) pendant 1 h par fois. Après cela, les solutions d’extraction ont été filtrées et mélangées. La solution mélangée a été concentrée par évaporation sous pression réduite. Ensuite, les extraits séchés ont été réduits en poudre et conservés dans un dessiccateur jusqu’à l’analyse. Les extraits contiennent de la rhéine, de l’émodine, du glycoside stilbène, de la liquiritine, de l’ononine, du verbascoside, de l’acide gallique, de la schisandrine, de la liquiritigénine, de l’acide glycyrrhizique et de l’isoliquiritigénine 0,4, 46,3, 231,6, 270,5, 161,1, 27,8, 71,8, 65,2, 16,9, 519,7 et 9,6 μg/g, respectivement. Les structures des composés de l’étude sont présentées dans la figure 1.

Figure 1

Structures chimiques de onze composants.

2.4. Préparation des solutions d’étalonnage et des échantillons de contrôle de qualité

Pour réaliser la solution mère, la rhéine, l’émodine, le glycoside de stilbène, la liquiritine, l’ononine, le verbascoside, l’acide gallique, la schisandrine, la liquiritigénine, l’acide glycyrrhizique, l’isoliquiritigénine et l’icariine (solution étalon interne) ont été pesés séparément et dilués avec du méthanol jusqu’à une concentration finale de 1 mg/mL. La solution étalon mixte a été obtenue en mélangeant un volume approprié de onze solutions mères et en les diluant avec du méthanol.

Les solutions d’étalonnage ont été préparées en dopant les 20 μL de la solution étalon mixte et 20 μL d’IS dans 100 μL de plasma de rat vierge. Les concentrations finales des analytes de série étaient dans la gamme de 8-2000 ng/mL pour l’acide glycyrrhizique ; 4-1000 ng/mL pour la liquiritine ; 0,8-200 ng/mL pour l’émodine, l’acide gallique, l’ononine, la schisandrine et le glycoside de stilbène ; et 0,4-100 ng/mL pour l’isoliquiritigénine, la liquiritigénine, la rhéine et le verbascoside.

Des échantillons de contrôle de qualité (CQ) à trois concentrations (concentration faible, moyenne et élevée) ont été constitués de solutions standard mélangées appropriées avec un échantillon de sang vierge comme solutions d’étalonnage pour atteindre les concentrations requises. Toutes les solutions ont été conservées à 4°C.

2.5. Préparation des échantillons de plasma

Le plasma (100 μL) a été dopé avec 20 μL de méthanol, 20 μL de l’IS (icariine, 1 μg/mL) et 20 μL d’acide formique, puis mélangé au vortex. Le mélange a été extrait avec 800 μL d’acétate d’éthyle par mélange vortex pendant 5 min à température ambiante. Après centrifugation à 14 000 rpm pendant 10 min, le surnageant a été recueilli dans un tube propre et évaporé à sec sous un courant d’azote. Le résidu a été reconstitué dans 50 μL de méthanol à 50%, vortexé pendant 5 min, et centrifugé à 14 000 rpm pendant 10 min. Enfin, 10 μL de surnageant ont été injectés dans le système LC-MS/MS pour analyse.

2.6. Validation de la méthode

2.6.1. Spécificité

La spécificité a été évaluée en analysant des échantillons de sang vierges provenant de six rats différents. Chaque échantillon de plasma a été évalué pour l’interférence endogène en utilisant le programme d’extraction suggéré et les conditions LC-MS/MS ci-dessus.

2.6.2. Linéarité et LLOQ

La linéarité a été obtenue en dosant le plasma de rat vierge avec un sérieux de la solution standard mélangée et IS en double sur 3 jours consécutifs. Les courbes d’étalonnage ont été tracées par les rapports de surface de pic (y) de l’analyte contre l’étalon interne en fonction de la concentration nominale (x). Le facteur de pondération est de 1/x. La limite inférieure de quantification (LLOQ) a été évaluée en fonction du bruit de base, définissant un rapport signal/bruit d’environ 10.

2.6.3. Précision et exactitude

La précision et l’exactitude ont été évaluées en déterminant des échantillons CQ à des niveaux de concentration faibles, moyens et élevés (20, 200 et 2000 ng/mL pour l’acide glycyrrhizique ; 10, 100, et 1000 ng/mL pour la liquiritine ; 2, 20, et 200 ng/mL pour l’émodine, l’acide gallique, l’ononine, la schisandrine, et le glycoside de stilbène ; 1, 10, et 100 ng/mL pour l’isoliquiritigénine, la liquiritigénine, la rhéine, et le verbascoside). Tous les niveaux de concentration ont été mesurés dans six répétitions. La précision et l’exactitude ont été testées une fois par jour et répétées pendant 3 jours consécutifs avec la courbe d’étalonnage standard. La précision intra- et inter-journalière a été définie comme l’écart-type relatif (RSD), tandis que l’exactitude a été déterminée par l’erreur relative (RE %).

2.6.4. Récupération d’extraction et effet de matrice

La récupération d’extraction de onze analytes à trois niveaux de concentration et l’IS ont été évalués en comparant les surfaces de pic obtenues à partir des échantillons extraits avec celles des échantillons post-extraits. L’effet de matrice des échantillons et l’IS ont été estimés par les rapports des surfaces de pics des analytes dans les échantillons dopés post-extraits par rapport à ceux obtenus à partir d’échantillons non extraits. La récupération par extraction et l’effet de matrice ont été testés dans six parallèles.

2.6.5. Stabilité

La stabilité des analytes dans les échantillons de plasma a été déterminée en analysant des échantillons CQ de trois niveaux de concentration dans différentes conditions : stockés au passeur automatique d’échantillons pendant 12 h, à température ambiante pendant 6 h, sous trois cycles de congélation-décongélation et stockés à -70°C pendant 14 jours. Toutes les études de stabilité ont été mesurées dans six répétitions.

2.7. Étude pharmacocinétique

Des rats mâles Sprague-Dawley (230-250 g) ont été obtenus auprès de Beijing HFK Experimental Animal Technology Co., Ltd. Les rats ont été maintenus dans des conditions environnementales contrôlées et ils ont jeûné pendant 12 h avec un accès libre à l’eau avant les expériences. Les extraits de TMYX ont été dissous dans la CMC-Na et administrés par voie orale aux rats à raison de 8,3 g/kg. Les échantillons de sang (200 μL) ont été prélevés dans la veine fossa orbitalis du rat à 0, 0,03, 0,083, 0,17, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 24, 36 et 48 h après l’administration orale dans des tubes héparinés. Ensuite, les échantillons de sang ont été centrifugés à 7000 rpm pendant 10 min pour obtenir immédiatement l’échantillon de plasma. Enfin, le plasma obtenu a été conservé à -70°C jusqu’à son analyse. Les paramètres pharmacocinétiques ont été calculés par le programme informatique « Drug and Statistics 2.0 » (DAS 2.0) (Medical College of Wannan, China).

3. Résultat et discussion

3.1. Méthode HPLC-MS/MS

Plusieurs phases mobiles ont été testées. En comparaison avec un système de phase mobile à gradient avec acétonitrile-eau ou méthanol-eau, la phase mobile contient 0,1% d’acide formique dans l’eau pourrait améliorer la forme du pic et augmenter la réponse du signal des analytes. Ainsi, nous avons choisi l’eau contenant 0,1% d’acide formique comme phase mobile.

Les solutions standard des analytes et de l’étalon interne ont été injectées dans le spectromètre de masse, respectivement. L’ononine et la schisandrine ont été testées en mode ion positif, tandis que les autres en mode négatif. Les transitions optimisées du précurseur à la production ont été surveillées à 238,9→211,0 pour la rhéine, 269,0→225,0 pour l’émodine, 405,2→242,8 pour le glycoside de stilbène, 417,1→255,0 pour la liquiritine, 431,2→269,1 pour l’ononine, 623.0→161,1 pour le verbascoside, 169,0→125,1 pour l’acide gallique, 433,3→384,2 pour la schisandrine, 255,3→119,1 pour la liquiritigénine, 821,1→350,5 pour l’acide glycyrrhizique, 255,1→118,9 pour l’isoliquiritigénine et 721,0→513,2 pour l’IS. Toutes les données ont été présentées dans le tableau 1.

3.2. Préparation des échantillons

Dans l’expérience, nous avons testé deux méthodes pour disposer de l’échantillon de plasma, y compris l’extraction liquide-liquide (LLE) et la précipitation des protéines (PPT). Les résultats montrent que la récupération et les effets de matrice des méthodes répondent aux exigences de la détermination des échantillons biologiques et les substances endogènes n’interfèrent pas avec l’analyse. Cependant, la méthode de PPT a montré une efficacité d’extraction plus faible et un effet de matrice relativement plus élevé. Par conséquent, nous avons choisi l’extraction liquide-liquide (LLE) avec de l’acétate d’éthyle pour préparer l’échantillon.

3.3. Validation de la méthode

3.3.1. Spécificité

La spécificité a été estimée en comparant les chromatogrammes d’échantillons sanguins vierges provenant de six rats différents avec des échantillons sanguins contenant des analytes. On a accédé aux chromatogrammes représentatifs de l’échantillon de sang vierge, de l’échantillon de sang vierge contenant onze analytes et IS, et de l’échantillon de plasma obtenu d’un rat après administration orale d’extraits de TMYX. Le temps de rétention de la rhéine, de l’émodine, du glycoside de stilbène, de la liquiritine, de l’ononine, du verbascoside, de l’acide gallique, de la schisandrine, de la liquiritigénine, de l’acide glycyrrhizique, de l’isoliquiritigénine et de l’IS était respectivement de 15,93, 17,63, 11,34, 11,31, 12,21, 11,01, 6,48, 16,41, 13,21, 13,34, 14,41 et 12,19 minutes. D’après les chromatogrammes, les substances endogènes présentes dans les échantillons de plasma n’interfèrent pas avec la détermination des analytes et des IS. Les chromatogrammes ont été présentés dans la figure 2.

(a)

(b)

(c)

.
(a)
(b)
(c)

Figure 2

Chromatogrammes RMN de onze analytes . Rhéine (1), émodine (2), glycoside stilbène (3), acide glycyrrhizique (4), liquiritine (5), liquiritigénine (6), isoliquiritigénine (7), ononine (8), verbascoside (9), acide gallique (10), schisandrine (11) et IS (12). (a) Plasma vierge ; (b) plasma vierge dopé avec les analytes et IS ; (c) échantillon de plasma après administration orale de l’extrait de TMYX.

3.3.2. Linéarité et sensibilité

Les résultats des courbes d’étalonnage, des plages linéaires, des coefficients de corrélation et des LLOQ ont été affichés dans le tableau 2. Les courbes d’étalonnage du plasma ont été construites dans la gamme de 8-2000 ng/mL pour l’acide glycyrrhizique ; 4-1000 ng/mL pour la liquiritine ; 0,8-200 ng/mL pour l’émodine, l’acide gallique, l’ononine, la schisandrine et le glycoside de stilbène ; 0,4-100 ng/mL pour l’isoliquiritigénine, la liquiritigénine, la rhéine et le verbascoside.

Les LLOQ de 11 analytes dans l’échantillon de plasma étaient inférieurs à 8 ng/mL, ce qui est suffisamment sensible pour les études pharmacocinétiques.

3.3.3. Précision et exactitude

Dans ce dosage, la précision et l’exactitude intra et inter journalière ont été analysées à trois niveaux de concentration dans six répétitions. Les données ont été présentées dans le tableau 3. La RSD de la précision intra- et inter-journalière était comprise entre 0,7 et 9,3 %. L’ER de l’exactitude était de ±14,0 %. Les résultats suggèrent que la méthode est précise et répétable pour l’analyse de tous les analytes dans le plasma de rat.

3.3.4. Récupération d’extraction et effet de matrice

Toutes les données de la récupération d’extraction et de l’effet de matrice ont été résumées dans le tableau 4. La récupération de l’extraction de 11 ingrédients à trois niveaux de concentration était dans la portée de 85,2-109,1%. Les effets de matrice de tous les analytes étaient compris entre 89,2 et 113,4 %. Les données qui manifestent la procédure de l’expérience est efficace et les effets de matrice pourraient être ignorés.

3.3.5. Stabilité

Pour étudier la stabilité des analytes, des échantillons CQ de trois niveaux de concentration dans les différentes conditions de stockage ont été testés, y compris stockés au passeur automatique d’échantillons pendant 12 h après la préparation, à température ambiante pendant 6 h, à trois cycles de gel-dégel et à -70°C pendant 14 jours. Comme le montre le tableau 5, les résultats suggèrent que les analytes sont stables dans les conditions ci-dessus.

3.4. Étude pharmacocinétique

La méthode validée LC-MS/MS a été appliquée à l’étude pharmacocinétique des onze analytes dans un échantillon de sang de rat après administration orale de TMYX à une dose unique de 8,3 g/kg. Les principaux paramètres pharmacocinétiques sont présentés dans le tableau 6. Et les profils moyens de concentration plasmatique en temps des onze principes actifs ont été présentés dans la figure 3.

Figure 3

Courbes de concentration plasmatique moyenne en fonction du temps de la rhéine, de l’émodine, du glycoside de stilbène, liquiritine, ononine, verbascoside, acide gallique, schisandrine, liquiritigénine, acide glycyrrhizique et isoliquiritigénine après administration orale d’un extrait de TMYX (moyenne ± SD, n=6).

Les Tmax de la rhéine, de l’émodine, du glycoside de stilbène, de la liquiritine, de l’ononine, du verbascoside, de l’acide gallique et de la schisandrine sont de 0.36±0,31 h, 0,32±0,14 h, 0,50±0,31 h, 0,50±0,46 h, 0,46±0,10 h, 0,37±0,18 h, 0,75±0,67 h et 1,00±0,92 h, respectivement. Le Tmax montre que huit ingrédients sont absorbés rapidement. Des doubles pics sont détectés dans les profils de concentration plasmatique moyenne en fonction du temps pour la liquiritigénine, l’acide glycyrrhizique et l’isoliquiritigénine. Le premier pic de trois ingrédients est apparu à 0,20 h, 2,13 h et 0,28 h et le second pic à 7,20 h, 17,67 h et 7,00 h, respectivement. Il pourrait résulter de la circulation hépato-entérale. Un seul pic de concentration plasmatique en fonction du temps de la liquiritigénine, de l’isoliquiritigénine et de l’acide glycyrrhizique a été rapporté dans le plasma de rat après administration orale de Radix glycyrrhizae ou de la combinaison de Radix glycyrrhizae et de Ramulus cinnamomi . Les différences peuvent provenir des effets d’autres plantes dans le TMYX, ce qui nécessite des expériences supplémentaires. Outre les doubles pics, la demi-vie d’élimination (t1 /2) de la rhéine, de l’émodine, de l’acide gallique, de la glycyrrhizine, du glycoside de stilbène, du verbascoside, de la formononétine et de la schisandrine varie de 1,53 h à 4,21 h, ce qui suggère que ces huit analytes sont éliminés rapidement dans les échantillons de sang de rat après administration orale. La tendance pharmacocinétique similaire de la schisandrine a été rapportée après administration orale de l’extrait aqueux de Fructus schisandrae. Il a également été signalé qu’un pic a été observé pour l’émodine et l’acide gallique chez des rats traités avec Radix polygoni multiflori. Les t1 /2 de la liquiritigénine, de l’acide glycyrrhizique et de l’isoliquiritigénine sont de 12,70 h, 18,19 h et 13.46 h, ce qui indique que l’ingrédient a un temps de traitement plus long, en particulier l’isoliquiritigénine et l’acide glycyrrhizique, qui peuvent encore être détectés in vivo à 48 h.

4. Conclusion

Dans notre expérience, nous avons développé une méthode de HPLC-MS/MS pour détecter la rhéine, l’émodine, le glycoside stilbène, la liquiritine, l’ononine, le verbascoside, l’acide gallique, la schisandrine, la liquiritigénine, l’acide glycyrrhizique et l’isoliquiritigénine dans le plasma de rat. Les paramètres pharmacocinétiques seraient utiles pour le développement ultérieur et l’utilisation en clinique de TMYX. Les 11 ingrédients actifs du TMYX, qui ont été absorbés dans le plasma, fourniraient des données à l’appui de l’amélioration du contrôle de la qualité.

Data Availability

Les données utilisées pour soutenir les résultats de cette étude sont disponibles sur demande auprès de l’auteur correspondant.

Conflits d’intérêts

Les auteurs déclarent qu’il n’y a pas de conflits d’intérêts.

Remerciements

Cette étude a été soutenue par la Fondation nationale des sciences naturelles de Chine (81673824 et 81503457) et le projet de recherche de la Commission municipale de l’éducation de Tianjin (2017KJ139).