HPLC-MS/MS módszer kifejlesztése 11 bioaktív vegyület meghatározására a Tongmai Yangxin tablettában és alkalmazása egy farmakokinetikai vizsgálatban patkányokon

Abstract

Egy érzékeny és megbízható HPLC-MS/MS módszert fejlesztettek ki és validáltak tizenegy bioaktív vegyület (rhein, emodin, stilbene glikozid, liquiritin, ononin, verbaszkozid, galluszsav, szkizandrin, liquiritigenin, glicirrizinsav és izoliquiritigenin) meghatározása patkány plazmában a Tongmai Yangxin tabletta orális beadását követően. Az összegyűjtött plazmamintákat savanyítás után etil-acetáttal végzett folyadék-folyadék extrakcióval állítottuk elő. Tizenegy vegyületet CORTECS™ C18 oszlopon választottunk el, 0,1% hangyasavból deionizált vízben és acetonitrilből álló mobilfázisokkal. Az áramlási sebesség 0,3 ml/perc volt. A detektálást tandem tömegrendszerrel végeztük, elektrospray ionizációs (ESI) forrással, pozitív és negatív ionizációval, többszörös reakciófigyelő (MRM) üzemmódban. A kalibrációs görbék lineárisak voltak a glicirrizinsav esetében 8-2000 ng/ml; liquiritin esetében 4-1000 ng/ml; emodin, galluszsav, ononin, schisandrin és stilbene-glikozid esetében 0,8-200 ng/ml; izoliquiritigenin, liquiritigenin, rhein és verbaszkozid esetében 0,4-100 ng/ml tartományban. Az analitok napon belüli és napon belüli pontossága kevesebb mint 9,3% és 8,5% volt. Az intra- és internapos pontosság -14,0% és 10,3%, illetve -6,5% és 9,6% között volt. Eközben az analitok extrakciós visszanyerése plazmamintákban 85,2% és 109,1% között, a mátrixhatás pedig 89,2% és 113,4% között volt. A kifejlesztett módszert sikeresen alkalmazták tizenegy bioaktív vegyület farmakokinetikájára patkány plazmában a Tongmai Yangxin Pill receptúra orális beadása után.

1. Bevezetés

A hagyományos kínai orvoslás (TCM) a természet értékes kincse. A TCM-et évezredek óta használják a klinikumban, és egyre növekvő figyelmet vonzanak a különböző betegségek sikeres, minimális mellékhatásokkal történő kezelése miatt . A TCM recept, a klinikai gyógyászatban leggyakrabban használt forma, többkomponensű és többcélú. A multikomponensek és a multicélok a TCM farmakológiai hatásainak kiválósága és jellemzője .

A Tongmai Yangxin Pill (TMYX) a Kínai Gyógyszerkönyvben dokumentált hagyományos kínai szabadalmi gyógyszer. A receptet egy jól ismert “GuiZhi-GanCao” gyógynövénypárból fejlesztették ki, amelyet Zhongjing Zhang a keleti Han-dinasztia idején a “Shang-Han-Lun”-ban dokumentált. A recept tizenegy gyógynövényből áll, köztük Radix rehmanniae, Caulis spatholobi, Radix glycyrrhizae, Ramulus cinnamomi, Radix ophiopogonis, Radix polygoni multiflori preparata, Asini corii colla, Fructus schisandrae, Radix codonopsis, Capapax et Plastrum testudinis és Fructus jujubae . A TMYX-et több évtizede használják szívkoszorúér-betegség, szívritmuszavar, mellkasi fájdalom és angina pectoris kezelésére . A modern farmakológiai vizsgálatok azt mutatják, hogy a TMYX jelentős hatással van a szívbetegségekre. A TMYX-ből származó négy aktív flavonoid vegyület (glasperin A, glicikumarin, licorisoflavan A és licoisoflavon A) kielégítő biológiai aktivitást mutatott, és elősegítette a humán köldökvéna endotélsejtek proliferációját és angiogenezisét zebrahalban . Eközben Liu és munkatársai arról számoltak be, hogy a TMYX öt frakciója antiepitheliális-mesenchymális átmeneti aktivitást fejtett ki . Tao eredményei azt mutatták, hogy hat magas R értékű hatóanyag (gomisin D, schisandrin, glicirrizinsav, stilbene glikozid, formononetin és ononin) dózisfüggő módon gyulladáscsökkentő hatást fejt ki .

A TMYX farmakológiai hatásai a változatos kémiai összetételen alapulnak. Chen jelentése szerint 80 vegyületet azonosítottak vagy sejtettek HPLC-MS segítségével, köztük 23 flavon és glükuronidjaik, 6 fenetilalkohol-glikozid, 20 triterpén-szaponin, 15 lignán és 18 egyéb vegyület . Fan 40 felszívódott bioaktív komponenst jellemzett a TMYX orális beadása után patkányszérumban UPLC/Q-TOF-MS segítségével . A 40 komponens közül 2 a Radix rehmanniae, 10 a Radix codonopsis, 2 a Radix ophiopogonis, 2 a Ramulus cinnamomi, 19 a Radix glycyrrhizae, 2 a Radix polygoni multiflori preparata, 5 a Caulis spatholobi, 1 a Fructus jujubae és 1 a Fructus schisandrae, amelyek közül néhány átfedésben van. A legtöbb összetevő gyulladáscsökkentő és antioxidációs hatást fejt ki, továbbá szív- és érrendszeri védőhatást fejt ki. A kutatócsoport HPLC-UV segítségével meghatározza a liquiritin, liquiritigenin, izoliquiritigenin, glicirrizinsav és glicirretinsav koncentrációját is patkányok plazmájában a Radix glycyrrhizae vagy a Radix glycyrrhizae és a Ramulus cinnamomi kombinációjának orális beadását követően. Nincs azonban olyan publikáció, amely a TMYX farmakokinetikai vizsgálatáról számolna be.

A TCM-ek farmakokinetikája (PK) a TCM-ek farmakológiájának egyik ága. A TCM-ek PK-ja a gyógyszerek felszívódásának, eloszlásának, metabolizmusának és kiválasztásának törvényszerűségeinek kvantitatív vizsgálatára összpontosít az élő szervezetben. A TCM receptek többkomponensű PK-vizsgálata a TCM-ek modernizációjának egyik fontos kutatási szempontja volt. A PK-adatok megvilágíthatják az anyag alapját és feltárhatják a TCM-ek tudományos összefüggéseit. Fontos szerepet játszik az új kínai gyógyszerek létrehozásában, az adagolási formák javításában és a formulázási mechanizmus mechanizmusában is. A jelen tanulmányban először egy megbízható és érzékeny HPLC-MS/MS módszert fejlesztettek ki és alkalmaztak 11 bioaktív komponens, köztük a rein, emodin, sztilbénglikozid, liquiritin, ononin, verbaszkozid, galluszsav, szkizandrin, liquiritigenin, glicirrizinsav és izoliquiritigenin farmakokinetikai vizsgálatára patkányokban a TMYX orális beadása után. Feltárták a TMYX fő kémiai összetevőinek farmakokinetikai jellemzőit patkányokban, ami elméleti alapot biztosítana a TMYX klinikai felhasználásához.

2. Kísérleti

2.1. Kísérleti

2.1. Vegyszerek, reagensek és anyagok

A metanolt (kromatográfiás tisztaságú) és az acetonitrilt (kromatográfiás tisztaságú) a Merck Co. A hangyasavat (kromatográfiás tisztaság) a ROE Co., Ltd.-től szereztük be. Az ultratiszta vizet Milli-Q víztisztító rendszerrel (Millipore, Milford, MA, USA) állítottuk elő. A reint, emodint, sztilbénglikozidot, likiritint, ononint, verbaszkozidot, galluszsavat, skizandrint, likiritigenint, glicirrizinsavat, izoliquiritigenint és ikarint a Chengdu Must Bio-Technology Co., Ltd. cégtől vásároltuk. (Chengdu, Kína). A TMYX-et a Tianjin Zhongxin Pharmaceutical Group Co., Ltd.

2.2. szállította. Kromatográfiás és tömegspektrometriás körülmények

A HPLC-MS/MS rendszer egy Agilent 1200 nagy teljesítményű folyadékkromatográfból áll, amelyhez egy Aglient 6430 sorozatú, elektrospray ionizációs (ESI) forrással ellátott háromszoros négypólusú tömegspektrométer csatlakozik. A kromatográfiás elválasztást CORTECS C18 oszlopon (4,6 mm × 150 mm, 2,7 μm) végeztük, az oszlop hőmérsékletét 30 °C-on tartottuk. A 0,1%-os hangyasavból vízben (A) és acetonitrilből (B) álló mobilfázisokat használtuk a következő gradiens elúciós módszerrel: 0-10 perc, 10%-85% B; 10-13 perc, 85%-95% B; 13-19 perc, 95%-95% B. Az áramlási sebességet 0,3 ml/percben állítottuk be, az injekciós térfogat pedig 10 μL volt. Minden adatot Mass Hunter munkaállomás szoftverrel (Agilent Technologies, USA) elemeztünk.

A tömegspektrométert pozitív és negatív ionizációs többszörös reakciófigyelő (MRM) üzemmódban végeztük. A forrás paraméterei a következők voltak: a kapilláris feszültséget 300 V-ra állítottuk be pozitív ionizációs módban és -300 V-ra negatív ionizációs módban, a szárítógáz hőmérséklete 320 °C volt, az áramlás 11 L/perc, a porlasztógáz nyomása 30 psi volt. Az összetevők prekurzorát és előállítását, valamint az MRM paramétereket az 1. táblázatban tüntettük fel.

Vegyületek Prekurzor ion (m/z) Produkt ion (m/z) Frag. (V) C.E. (V) rhein 238.9 211.0 140 -10 emodin 269.0 225.0 145 -20 stilbene glycoside 405.2 242.8 145 -13 liquiritin 417.1 255.0 145 -13 ononin 431.2 269.1 10 13 verbascoside 623.0 161.1 116 -33 gallic acid 169.0 125.1 123 -12 schisandrin 433.3 384.2 100 14 liquiritigenin 255.3 119.1 121 -24 glicirrizinsav 821.1 350.5 125 -40 isoliquiritigenin 255.1 118.9 106 -23 icariin (IS) 721.0 513.2 145 -10

1. táblázat

11 analit és IS tömegspektrumának tulajdonságai.

2.3. táblázat. TMYX kivonat előállítása

A TMYX kivonatot a következőképpen állítottuk elő: Összesen 100 g TMYX port pontosan lemértünk, és kétszer extraháltuk hővisszafolyás alatt négyszeres mennyiségű 60%-os etanollal (v/v), alkalmanként 1 órán keresztül. Ezt követően az extrakciós oldatokat leszűrtük és összekevertük. Az elegyített oldatot csökkentett nyomáson történő bepárlással koncentráltuk. Ezután a szárított kivonatokat porrá zúztuk, és az elemzésig exszikkátorban tartottuk. A kivonatok reint, emodint, sztilbénglikozidot, likiritint, ononint, verbaszkozidot, galluszsavat, szkizandrint, likiritigenint, glicirrizinsavat és izoliquiritigenint 0,4, 46,3, 231,6, 270,5, 161,1, 27,8, 71,8, 65,2, 16,9, 519,7 és 9,6 μg/g-ban tartalmaztak. A vizsgálatban szereplő vegyületek szerkezetét az 1. ábra mutatja.

1. ábra

Tizenegy komponens kémiai szerkezete.

2.4. Kalibráló oldatok és minőségellenőrzési minták előállítása

A törzsoldat elkészítéséhez a reint, az emodint, a sztilbénglikozidot, a likiritint, az ononint, a verbaszkozidot, a galluszsavat, a szkizandrint, a likiritigenint, a glicirrizinsavat, az izolikvitigenint és az ikarint (belső standard oldat) külön-külön lemértük és metanollal 1 mg/ml végső koncentrációra hígítottuk. A kevert standard oldatot tizenegy törzsoldat megfelelő térfogatának összekeverésével és metanollal történő hígításával kaptuk.

A kalibrációs oldatokat úgy készítettük, hogy 20 μL kevert standard oldatot és 20 μL IS-t 100 μL vak patkányplazmába spicceltünk. A sorozat analitjeinek végső koncentrációi a glicirrizinsav esetében 8-2000 ng/ml; liquiritin esetében 4-1000 ng/ml; emodin, galluszsav, ononin, schisandrin és stilbene-glikozid esetében 0,8-200 ng/ml; izoliquiritigenin, liquiritigenin, rhein és verbaszkozid esetében pedig 0,4-100 ng/ml tartományban voltak.

A minőségellenőrzési (QC) minták három koncentrációban (alacsony, közepes és magas koncentráció) megfelelő kevert standard oldatokból és üres vérmintából készültek kalibrációs oldatként, hogy megfeleljenek a kívánt koncentrációknak. Minden oldatot 4°C-on tartottunk.

2.5. Plazmaminta előkészítése

A plazmához (100 μL) 20 μL metanolt, 20 μL IS-t (icariin, 1 μg/mL) és 20 μL hangyasavat adtunk, majd vortex-keveréssel összekevertük. Az elegyet 800 μL etil-acetáttal extraháltuk vortexkeveréssel 5 percig szobahőmérsékleten. Miután 10 percig 14 000 rpm-en centrifugáltuk, a felülúszót tiszta csőbe gyűjtöttük, és nitrogénáram alatt szárazra pároltuk. A maradékot 50 μL 50%-os metanolban visszaállítottuk, 5 percig vortexeltük, majd 10 percig 14 000 rpm-en centrifugáltuk. Végül 10 μL felülúszót injektáltunk az LC-MS/MS rendszerbe az elemzéshez.

2.6. A módszer validálása

2.6.1. Specificitás

A specificitást hat különböző patkányból származó üres vérminta elemzésével vizsgáltuk. Minden egyes plazmamintát a fenti javasolt extrakciós program és LC-MS/MS körülmények alkalmazásával vizsgáltunk endogén interferencia szempontjából.

2.6.2. A vérvizsgálat eredményei. Linearitás és LLOQ

A linearitást úgy értük el, hogy a vak patkányplazmát a kevert standard oldat és az IS egy komolyabb keverékével vizsgáltuk 3 egymást követő napon duplikáltan. A kalibrációs görbéket az analit és a belső standard közötti csúcsterület-arányok (y) és a névleges koncentráció (x) függvényében ábrázoltuk. A súlytényező 1/x. A mennyiségi meghatározás alsó határát (LLOQ) az alapvonal zajának megfelelően értékeltük, mintegy 10-es jel-zaj arányt meghatározva.

2.6.3. Precizitás és pontosság

A precizitást és a pontosságot a QC-minták alacsony, közepes és magas koncentrációjú (20, 200 és 2000 ng/ml glicirrizinsav esetében; 10, 100 és 1000 ng/ml liquiritin esetében; 2, 20 és 200 ng/ml emodin, galluszsav, ononin, schisandrin és stilbene glikozid esetében; 1, 10 és 100 ng/ml izoliquiritigenin, liquiritigenin, rhein és verbaszkozid esetében). Minden koncentrációs szintet hat ismétlésben mértünk. A precizitást és a pontosságot naponta egyszer vizsgáltuk, és 3 egymást követő napon megismételtük a standard kalibrációs görbével. A napon belüli és a napok közötti pontosságot a relatív szórással (RSD), míg a pontosságot a relatív hibával (RE %) határoztuk meg.

2.6.4. A pontosságot a relatív hibával (RE %) határoztuk meg. Extrakciós visszanyerés és mátrixhatás

A tizenegy analit extrakciós visszanyerését három koncentrációs szinten és az IS-t úgy vizsgáltuk, hogy összehasonlítottuk az extrahált mintákból kapott csúcsterületeket az extrakció utáni mintákéval. A minták mátrixhatását és az IS-t az utólag extrahált tüskésített mintákban lévő analitok csúcsterület-arányai és a nem extrahált mintákból kapott értékek alapján becsültük meg. Mind az extrakciós visszanyerést, mind a mátrixhatást hat párhuzamos vizsgálatban vizsgáltuk.

2.6.5. Stabilitás

A plazmamintákban lévő analitok stabilitását úgy határoztuk meg, hogy három koncentrációjú QC-mintát elemeztünk különböző körülmények között: 12 órán keresztül autosamplerben, 6 órán keresztül szobahőmérsékleten, három fagyasztási-olvasztási ciklus alatt és 14 napig -70°C-on tárolva. Minden stabilitási vizsgálatot hat ismétlésben mértünk.

2.7. Farmakokinetikai vizsgálat

A hím Sprague-Dawley patkányokat (230-250 g) a Beijing HFK Experimental Animal Technology Co., Ltd.-től szereztük be. A patkányokat kontrollált környezeti körülmények között tartották, és a kísérletek előtt 12 órán át böjtöltek, szabad vízhez jutással. A TMYX kivonatokat CMC-Na-ban oldottuk fel, és 8,3 g/kg mennyiségben orálisan adtuk be a patkányoknak. A vérmintákat (200 μL) a patkányok fossa orbitalis vénájából vettük 0, 0,03, 0,083, 0,17, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 24, 36 és 48 órával az orális beadást követően heparinizált csövekbe. Ezután a vérmintákat 10 percig 7000 rpm-en centrifugáltuk, hogy azonnal megkapjuk a plazmamintát. Végül a kapott plazmát -70°C-on tároltuk az elemzésig. A farmakokinetikai paramétereket a “Drug and Statistics 2.0” (DAS 2.0) számítógépes programmal (Medical College of Wannan, Kína) számoltuk ki.

3. Eredmények és megbeszélés

3.1. Eredmények és megbeszélés

3.1. Gyógyszerkinetikai paraméterek. HPLC-MS/MS módszer

Változatos mobilfázisokat teszteltünk. Az acetonitril-víz vagy metanol-víz gradiens mobilfázis rendszerrel összehasonlítva a 0,1% hangyasavat vízben tartalmazó mobilfázis javítani tudta a csúcs alakját és növelte az analitok jelválaszát. Ezért a 0,1% hangyasavat tartalmazó vizet választottuk mobilfázisnak.

A tömegspektrométerbe az analitok standard oldatait és a belső standardot injektáltuk. Az ononint és a szkiszandrint pozitív ion módban, míg a többit negatív módban vizsgáltuk. Az optimalizált prekurzor-produkció átmeneteket a rhein esetében 238,9→211,0, az emodin esetében 269,0→225,0, a sztilbénglikozid esetében 405,2→242,8, a liquiritin esetében 417,1→255,0, az ononin esetében 431,2→269,1, az ononin esetében 623.0→161,1 a verbaszkozid, 169,0→125,1 a galluszsav, 433,3→384,2 a szkiszandrin, 255,3→119,1 a likiritigenin, 821,1→350,5 a glicirrizinsav, 255,1→118,9 az izolikiritigenin és 721,0→513,2 az IS. Az összes adatot az 1. táblázat tartalmazza.

3.2. Mintaelőkészítés

A kísérletben két módszert teszteltünk a plazmaminta ártalmatlanítására, köztük a folyadék-folyadék extrakciót (LLE) és a fehérje kicsapást (PPT). Az eredmények azt mutatják, hogy mind a módszerek visszanyerése, mind a mátrixhatás megfelel a biológiai minták meghatározására vonatkozó követelményeknek, és az endogén anyagok nem zavarják az elemzést. A PPT módszer azonban relatíve alacsonyabb extrakciós hatékonyságot és nagyobb mátrixhatást mutatott. Következésképpen a minta előkészítéséhez a folyadék-folyadék extrakciót (LLE) választottuk etil-acetáttal.

3.3. A PPP módszerrel történő extrakciót a PPP módszerrel végezzük. A módszer validálása

3.3.1. Specificitás

A specificitást hat különböző patkányból származó üres vérminták kromatogramjainak összehasonlításával becsültük meg az analiteket tartalmazó vérmintákkal. Az üres vérminta, a tizenegy analitot és IS-t tartalmazó üres vérminta, valamint a TMYX-kivonatok orális beadása után egy patkányból nyert plazmaminta reprezentatív kromatogramjaihoz jutottunk hozzá. A rein, emodin, sztilbénglikozid, likiritin, ononin, verbaszkozid, galluszsav, szkizandrin, likiritigenin, glicirrizinsav, izoliquiritigenin és IS retenciós ideje 15,93, 17,63, 11,34, 11,31, 12,21, 11,01, 6,48, 16,41, 13,21, 13,34, 14,41 és 12,19 perc volt. A kromatogramok alapján a plazmamintákban lévő endogén anyagok nem zavarják az analit és az IS meghatározását. A kromatogramokat a 2. ábra mutatja.

(a)

(b)

(c)

.
(a)
(b)
(c)

2. ábra

MRM kromatogram tizenegy analitről. rein (1), emodin (2), sztilbénglikozid (3), glicirrizinsav (4), liquiritin (5), liquiritigenin (6), izoliquiritigenin (7), ononin (8), verbaszkozid (9), galluszsav (10), szkizandrin (11) és IS (12). (a) Üres plazma; (b) az analitekkel és az IS-sel spiccelt üres plazma; (c) plazmaminta a TMYX-kivonat orális beadása után.

3.3.2. Az analitok és az analitikus anyagokat tartalmazó minták. Linearitás és érzékenység

A kalibrációs görbék, a lineáris tartományok, a korrelációs együtthatók és az LLOQ-ok eredményeit a 2. táblázat tartalmazza. A plazma kalibrációs görbék a glicirrizinsav esetében 8-2000 ng/ml; liquiritin esetében 4-1000 ng/ml; emodin, galluszsav, ononin, schisandrin és stilbene-glikozid esetében 0,8-200 ng/ml; izoliquiritigenin, liquiritigenin, rhein és verbaszkozid esetében 0,4-100 ng/ml tartományban készültek.

A plazmamintában 11 analit LLOQ-értékei 8 ng/ml-nél kisebbek voltak, ami elég érzékeny a farmakokinetikai vizsgálatokhoz.

3.3.3. Precizitás és pontosság

Ebben a vizsgálatban az intra- és internapos pontosságot és pontosságot három koncentrációs szinten, hat ismétlésben elemezték. Az adatokat a 3. táblázatban mutattuk be. A napon belüli és napközi pontosság RSD értéke 0,7 és 9,3% között volt. A pontosság RE értéke ±14,0%-on belül volt. Az eredmények arra utalnak, hogy a módszer pontos és megismételhető az összes analit elemzésére patkányplazmában.

3.3.4. Az extrakciós visszanyerés és a mátrixhatás

Az extrakciós visszanyerés és a mátrixhatás adatait a 4. táblázatban foglaltuk össze. A 11 összetevő extrakciós visszanyerése három koncentrációs szinten 85,2-109,1% között volt. Az összes analit mátrixhatása 89,2-113,4% között mozgott. Ezek az adatok azt mutatják, hogy a kísérlet folyamata hatékony, és a mátrixhatásokat figyelmen kívül lehet hagyni.

3.3.5. Stabilitás

Az analitok stabilitásának vizsgálatára három koncentrációs szint QC-mintáit vizsgáltuk különböző tárolási körülmények között, többek között az előkészítést követően 12 órán keresztül autoszamplerben, 6 órán keresztül szobahőmérsékleten, három fagyasztási-olvasztási ciklusban és 14 napig -70°C-on tárolva. Amint az 5. táblázatban látható, az eredmények azt mutatják, hogy az analitok stabilak a fenti körülmények között.

3. ábra

Rein, emodin, stilbene glikozid plazma koncentráció-idő görbéi, liquiritin, ononin, verbaszkozid, galluszsav, szkizandrin, liquiritigenin, glicirrizinsav és izoliquiritigenin a TMYX-kivonat orális beadása után (átlag ± SD, n=6).

A rein, az emodin, a sztilbénglikozid, a likiritin, az ononin, a verbaszkozid, a galluszsav és a szkizandrin Tmax értéke 0.36±0,31 h, 0,32±0,14 h, 0,50±0,31 h, 0,50±0,46 h, 0,46±0,10 h, 0,37±0,18 h, 0,75±0,67 h és 1,00±0,92 h, illetve. A Tmax azt mutatja, hogy nyolc összetevő gyorsan felszívódik. A liquiritigenin, a glicirrizinsav és az izoliquiritigenin átlagos plazma koncentráció-idő profiljaiban kettős csúcsok észlelhetők. Az első csúcs három összetevő esetében 0,20 órakor, 2,13 órakor és 0,28 órakor, a második csúcs pedig 7,20 órakor, 17,67 órakor és 7,00 órakor jelent meg. Ez a hepatoenteralis keringésből eredhet. A liquiritigenin, az izoliquiritigenin és a glicirrizinsav egy csúcs plazma koncentráció-idő profiljáról számoltak be patkányok plazmájában a Radix glycyrrhizae vagy a Radix glycyrrhizae és a Ramulus cinnamomi kombinációjának orális beadását követően. A különbségek a TMYX-ben lévő más gyógynövények hatásaiból származhatnak, amelyek további kísérleteket igényelnek. A kettős csúcsok mellett a rhein, az emodin, a galluszsav, a glicirrizin, a glicirrizin, a sztilbénglikozid, a verbaszkozid, a formononetin és a szkizandrin eliminációs felezési ideje (t1 /2) 1,53 óra és 4,21 óra között változik, ami arra utal, hogy ez a nyolc analit a patkányvérmintában a szájon át történő beadást követően gyorsan eliminálódik. A skiszandrin hasonló farmakokinetikai tendenciájáról számoltak be a Fructus schisandrae vizes kivonatának orális beadása után . Azt is jelentették, hogy egy csúcsot figyeltek meg az emodin és a galluszsav esetében a patkányok adagolt feldolgozott Radix polygoni multiflori . A liquiritigenin, a glicirrizinsav és az izoliquiritigenin t1 /2 értéke 12,70 óra, 18,19 óra és 13 óra.46 óra, ami azt jelzi, hogy az összetevő hosszabb kezelési idővel rendelkezik, különösen az izoliquiritigenin és a glicirrizinsav, amelyek in vivo még 48 órán belül is kimutathatók.

4. Következtetés

Kísérletünkben kidolgoztunk egy HPLC-MS/MS módszert a rhein, emodin, sztilbén glikozid, likiritin, ononin, verbaszkozid, galluszsav, szkizandrin, likiritigenin, glicirrizinsav és izoliquiritigenin kimutatására patkányplazmában. A farmakokinetikai paraméterek hasznosak lennének a TMYX további fejlesztéséhez és klinikai felhasználásához. A TMYX 11 hatóanyagának a plazmába való felszívódása a minőségellenőrzés javításához nyújtana adattámogatást.

Adatok elérhetősége

A jelen tanulmány eredményeinek alátámasztására használt adatok kérésre elérhetők a megfelelő szerzőtől.

Érdekütközések

A szerzők kijelentik, hogy nincsenek érdekellentétek.

Megköszönések

Ezt a tanulmányt a Kínai Nemzeti Természettudományi Alapítvány (81673824 és 81503457) és a Tianjin Városi Oktatási Bizottság kutatási projektje (2017KJ139) támogatta.