- Abstract
- 1. Wprowadzenie
- 2. Eksperymentalne
- 2.1. Chemicals, Reagents, and Materials
- 2.2. Warunki chromatografii i spektrometrii mas
- 2.3. Przygotowanie ekstraktu TMYX
- 2.4. Roztwory kalibracyjne i próbki kontroli jakości Przygotowanie
- 2.5. Przygotowanie próbki osocza
- 2.6. Walidacja metody
- 2.6.1. Specyficzność
- 2.6.2. Liniowość i LLOQ
- 2.6.3. Precyzja i dokładność
- 2.6.4. Odzysk ekstrakcji i efekt matrycy
- 2.6.5. Stabilność
- 2.7. Badanie farmakokinetyczne
- 3. Wynik i dyskusja
- 3.1. Metoda HPLC-MS/MS
- 3.2. Przygotowanie próbki
- 3.3. Walidacja metody
- 3.3.1. Specyficzność
- 3.3.2. Liniowość i czułość
- 3.3.3. Precyzja i dokładność
- 3.3.4. Odzysk ekstrakcji i efekt matrycy
- 3.3.5. Stabilność
- 3.4. Badanie farmakokinetyczne
- 4. Wnioski
- Dostępność danych
- Konflikt interesów
- Podziękowania
Abstract
Czuła i wiarygodna metoda HPLC-MS/MS została opracowana i zwalidowana do jednoczesnego oznaczania jedenastu bioaktywnych związków (reiny, emodyny, glikozydu stilbenu, likwirytyny, ononiny, werbaskozydu, kwasu galusowego, schisandryny, likwirytygeniny, kwasu glicyretynowego i izoliquiritigeniny) w osoczu szczurów po doustnym podaniu pigułki Tongmai Yangxin. Zebrane próbki osocza zostały przygotowane przez ekstrakcję ciecz-ciecz octanem etylu po zakwaszeniu. Jedenaście związków rozdzielono na kolumnie CORTECS™ C18 z fazami ruchomymi składającymi się z 0,1% kwasu mrówkowego w wodzie dejonizowanej i acetonitrylu. Szybkość przepływu wynosiła 0,3 mL/min. Detekcja została przeprowadzona na tandemowym systemie mas ze źródłem jonizacji elektrospray (ESI) w jonizacji dodatniej i ujemnej z zastosowaniem trybu monitorowania reakcji wielokrotnych (MRM). Krzywe kalibracji były liniowe w zakresie 8-2000 ng/mL dla kwasu glicyryzynowego; 4-1000 ng/mL dla likirytyny; 0,8-200 ng/mL dla emodyny, kwasu galusowego, ononiny, schisandryny i glikozydu stilbenowego; 0,4-100 ng/mL dla izoliquiritigeniny, likirytygeniny, reiny i werbaskozydu, odpowiednio. Wewnątrz- i międzydobowa precyzja analitów była mniejsza niż 9,3% i 8,5%. Dokładność śród- i międzydobowa mieściła się w zakresie od -14,0% do 10,3% i od -6,5% do 9,6%. W międzyczasie odzysk ekstrakcyjny analitów w próbkach osocza wynosił od 85,2% do 109,1%, a efekt matrycy od 89,2% do 113,4%. Opracowana metoda została z powodzeniem zastosowana do badania farmakokinetyki jedenastu związków bioaktywnych w osoczu szczurów po doustnym podaniu recepty Tongmai Yangxin Pill.
1. Wprowadzenie
Tradycyjna Medycyna Chińska (TCM) jest cennym skarbem natury. TCM są stosowane w klinice od tysięcy lat i przyciągają coraz większą uwagę ze względu na leczenie różnych chorób z powodzeniem przy minimalnych skutkach ubocznych. Recepta TCM, najczęściej używana forma w medycynie klinicznej, ma wiele składników i wiele celów. Wieloskładnikowość i wielocelowość jest wyższością i cechą charakterystyczną działań farmakologicznych TCM.
Tongmai Yangxin Pill (TMYX) jest tradycyjnym chińskim lekiem patentowym udokumentowanym w Farmakopei Chińskiej. Recepta została opracowana na podstawie znanej pary ziół „GuiZhi-GanCao” udokumentowanej w „Shang-Han-Lun” przez Zhongjing Zhang we wschodniej dynastii Han. Recepta składa się z jedenastu ziół, w tym Radix rehmanniae, Caulis spatholobi, Radix glycyrrhizae, Ramulus cinnamomi, Radix ophiopogonis, Radix polygoni multiflori preparata, Asini corii colla, Fructus schisandrae, Radix codonopsis, Capapax et Plastrum testudinis i Fructus jujubae. TMYX jest stosowany w leczeniu choroby wieńcowej serca, arytmii, bólu w klatce piersiowej i dławicy piersiowej od kilkudziesięciu lat. Współczesne badania farmakologiczne wykazują, że TMYX ma znaczący wpływ na choroby serca. Cztery aktywne związki flawonoidowe (glyasperin A, glycycoumarin, licorisoflavan A i licoisoflavone A) z TMYX okazały się mieć zadowalającą aktywność biologiczną i promować proliferację i angiogenezę komórek śródbłonka ludzkiej żyły pępowinowej u rybek zebrafish. Tymczasem Liu i wsp. donoszą, że pięć frakcji TMYX wykazuje aktywność w zakresie transformacji nabłonkowo-mezenchymalnej. Wyniki Tao wskazały, że sześć aktywnych składników o wysokich wartościach R (gomisyna D, schisandryna, kwas lukrecjowy, glikozyd stilbenowy, formononetyna i ononina) wywierają działanie przeciwzapalne w sposób zależny od dawki .
Farmakologiczne efekty TMYX opierają się na zróżnicowanym składzie chemicznym. Chen zgłosił 80 związków zidentyfikowanych lub przypuszczalnych przy użyciu HPLC-MS, w tym 23 flawony i ich glukuronidy, 6 glikozydów alkoholu fenetylowego, 20 saponin triterpenowych, 15 lignanów i 18 innych związków. Fan scharakteryzował 40 wchłoniętych składników bioaktywnych po doustnym podaniu TMYX w surowicy szczura za pomocą UPLC/Q-TOF-MS . Te 40 składników, w tym 2 z Radix rehmanniae, 10 z Radix codonopsis, 2 z Radix ophiopogonis, 2 z Ramulus cinnamomi, 19 z Radix glycyrrhizae, 2 z Radix polygoni multiflori preparata, 5 z Caulis spatholobi, 1 z Fructus jujubae i 1 z Fructus schisandrae, z których niektóre się pokrywają. Większość składników wywiera działanie przeciwzapalne i antyoksydacyjne, a ponadto działa ochronnie na układ sercowo-naczyniowy. Zespół określa również stężenie likwirytyny, likwirytygeniny, izoliquiritigeniny, kwasu glicyretynowego i kwasu glicyretynowego w osoczu szczurów po doustnym podaniu Radix glycyrrhizae lub kombinacji Radix glycyrrhizae i Ramulus cinnamomi metodą HPLC-UV. Nie ma jednak publikacji, która opisywałaby badania farmakokinetyczne TMYX.
Farmakokinetyka (PK) TCMs jest gałęzią farmakologii TCMs. PK TCMs koncentruje się na ilościowych badaniach praw wchłaniania, dystrybucji, metabolizmu i wydalania leków w żywym organizmie. Badanie PK wieloskładnikowych recept TCM jest jednym z ważnych aspektów badawczych modernizacji TCM. Dane PK mogą wyjaśnić podstawę substancji i ujawnić naukowe konotacje TCM. Odgrywa również ważną rolę w tworzeniu nowych chińskich leków, ulepszaniu form dawkowania i mechanizmu formułowania mechanizmu. W niniejszym badaniu najpierw opracowano wiarygodną i czułą metodę HPLC-MS/MS i zastosowano ją do badania farmakokinetycznego 11 bioaktywnych składników, w tym reiny, emodyny, glikozydu stilbenowego, likwirytyny, ononiny, werbaskozydu, kwasu galusowego, schisandryny, likwirytygeniny, kwasu glicyretynowego i izoliquiritigeniny u szczurów po doustnym podaniu TMYX. Ujawniono charakterystykę farmakokinetyczną głównych składników chemicznych TMYX u szczurów, co stanowiłoby teoretyczną podstawę do zastosowania TMYX w klinice.
2. Eksperymentalne
2.1. Chemicals, Reagents, and Materials
Methanol (czystość chromatograficzna) i acetonitryl (czystość chromatograficzna) zostały zakupione w Merck Co., Ltd., a kwas mrówkowy (czystość chromatograficzna) został zakupiony w Merck Co. Kwas mrówkowy (czystość chromatograficzna) został zakupiony od ROE Co., Ltd. Wodę ultraczystą przygotowano w systemie oczyszczania wody Milli-Q (Millipore, Milford, MA, USA). Ren, emodynę, glikozyd stilbenowy, likwirytynę, ononinę, werbaskozyd, kwas galusowy, schisandrynę, likwirytygeninę, kwas glicyryzynowy, izoliquiritigeninę i ikarynę zakupiono od Chengdu Must Bio-Technology Co., Ltd. (Chengdu, Chiny). (Chengdu, Chiny). TMYX zostały dostarczone przez Tianjin Zhongxin Pharmaceutical Group Co., Ltd.
2.2. Warunki chromatografii i spektrometrii mas
System HPLC-MS/MS składa się z wysokosprawnej chromatografii cieczowej Agilent 1200 sprzężonej ze spektrometrem mas serii Aglient 6430 z potrójnym kwadrupolem i źródłem jonizacji elektrospray (ESI). Rozdział chromatograficzny uzyskano na kolumnie CORTECS C18 (4,6 mm × 150 mm, 2,7 μm), a temperaturę kolumny utrzymywano na poziomie 30°C. Fazy ruchome składające się z 0,1% kwasu mrówkowego w wodzie (A) i acetonitrylu (B) stosowano w następującej metodzie elucji gradientowej: 0-10 min, 10%-85% B; 10-13 min, 85%-95% B; 13-19 min, 95%-95% B. Szybkość przepływu ustalono na 0,3 mL/min, a objętość wstrzyknięcia wynosiła 10 μL. Wszystkie dane analizowano za pomocą oprogramowania stacji roboczej Mass Hunter (Agilent Technologies, USA).
Spektrometr masowy prowadzono zarówno w trybie monitorowania reakcji wielokrotnych (MRM) z jonizacją dodatnią, jak i ujemną. Parametry źródła były następujące: napięcie kapilary ustawione na 300 V dla trybu jonizacji dodatniej i -300 V dla trybu jonizacji ujemnej, temperatura gazu suszącego wynosiła 320°C, przepływ 11 L/min, a ciśnienie gazu nebulizującego 30 psi. Prekursor i produkcja składników oraz parametry MRM zostały przedstawione w tabeli 1.
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
2.3. Przygotowanie ekstraktu TMYX
Ekstrakt TMYX przygotowano w następujący sposób: Łącznie 100 g proszku TMYX dokładnie zważono i dwukrotnie ekstrahowano pod chłodnicą zwrotną czterokrotnie ilością 60% etanolu (v/v) przez 1 h za każdym razem. Następnie roztwory ekstrakcyjne zostały przefiltrowane i wymieszane. Zmieszany roztwór zatężono przez odparowanie pod zmniejszonym ciśnieniem. Następnie wysuszone ekstrakty rozdrobniono na proszek i przechowywano w eksykatorze do czasu analizy. Ekstrakty zawierają reinę, emodynę, glikozyd stilbenowy, likwirytynę, ononinę, werbaskozyd, kwas galusowy, schisandrynę, likwirytygeninę, kwas glicyryzynowy i izoliquiritigeninę w ilościach odpowiednio 0,4, 46,3, 231,6, 270,5, 161,1, 27,8, 71,8, 65,2, 16,9, 519,7 i 9,6 μg/g. Struktury związków występujących w badaniach przedstawiono na rysunku 1.
2.4. Roztwory kalibracyjne i próbki kontroli jakości Przygotowanie
W celu sporządzenia roztworu podstawowego, oddzielnie odważono reinę, emodynę, glikozyd stilbenowy, likwirytynę, ononinę, werbaskozyd, kwas galusowy, schisandrynę, likwirytygeninę, kwas glicyryzynowy, izoliquiritigeninę i ikarynę (roztwór wzorca wewnętrznego) i rozcieńczono metanolem do końcowego stężenia 1 mg/mL. Mieszany roztwór wzorcowy otrzymano przez zmieszanie odpowiedniej objętości jedenastu roztworów podstawowych i rozcieńczenie metanolem.
Roztwory kalibracyjne przygotowano przez wsypanie 20 μL mieszanego roztworu wzorcowego i 20 μL IS do 100 μL ślepej próby osocza szczura. Końcowe stężenia analitów serii były w zakresie 8-2000 ng/mL dla kwasu glicyryzynowego; 4-1000 ng/mL dla liquirytyny; 0.8-200 ng/mL dla emodyny, kwasu galusowego, ononiny, schisandryny i glikozydu stilbenu; i 0.4-100 ng/mL dla izoliquiritigeniny, liquiritigeniny, reiny i werbaskozydu.
Próbki kontroli jakości (QC) w trzech stężeniach (niskie, średnie i wysokie stężenie) zostały wykonane z odpowiednich mieszanych roztworów standardowych z próbką ślepej krwi jako roztworami kalibracyjnymi, aby spełnić wymagane stężenia. Wszystkie roztwory przechowywano w temperaturze 4°C.
2.5. Przygotowanie próbki osocza
Osocze (100 μL) zostało spikowane 20 μL metanolu, 20 μL IS (ikaryna, 1 μg/mL) i 20 μL kwasu mrówkowego, a następnie wymieszane vorteksem. Mieszaninę ekstrahowano 800 μL octanu etylu, mieszając worteksem przez 5 min w temperaturze pokojowej. Po wirowaniu przy 14 000 obr/min przez 10 min supernatant zebrano do czystej probówki i odparowano do sucha pod strumieniem azotu. Pozostałość rekonstytuowano w 50 μL 50% metanolu, worteksowano przez 5 min i wirowano przy 14 000 obr/min przez 10 min. Na koniec 10 μL supernatantu wstrzyknięto do systemu LC-MS/MS w celu analizy.
2.6. Walidacja metody
2.6.1. Specyficzność
Swoistość została oceniona przez analizę próbek ślepej krwi od sześciu różnych szczurów. Każda próbka osocza została oceniona pod kątem interferencji endogennych przy użyciu sugerowanego programu ekstrakcji i warunków LC-MS/MS podanych powyżej.
2.6.2. Liniowość i LLOQ
Liniowość została osiągnięta przez oznaczenie ślepej plazmy szczurów z poważną ilością mieszanego roztworu standardowego i IS w duplikatach przez 3 kolejne dni. Krzywe kalibracji zostały wykreślone przez stosunek powierzchni piku (y) analitu do wzorca wewnętrznego w stosunku do stężenia nominalnego (x). Współczynnik wagowy wynosi 1/x. Dolna granica oznaczalności (LLOQ) została oceniona zgodnie z szumem linii podstawowej, określając stosunek sygnału do szumu wynoszący około 10.
2.6.3. Precyzja i dokładność
Precyzja i dokładność zostały ocenione przez oznaczenie próbek QC przy niskich, średnich i wysokich poziomach stężenia (20, 200, i 2000 ng/mL dla kwasu glicyryzynowego; 10, 100, i 1000 ng/mL dla likirytyny; 2, 20, i 200 ng/mL dla emodyny, kwasu galusowego, ononiny, schisandryny i glikozydu stilbenowego; 1, 10, i 100 ng/mL dla izoliquiritigeniny, likirytygeniny, reiny i werbaskozydu). Wszystkie poziomy stężenia były mierzone w sześciu powtórzeniach. Precyzję i dokładność badano raz dziennie i powtarzano przez 3 kolejne dni przy użyciu standardowej krzywej kalibracyjnej. Precyzję wewnątrz- i międzydobową określono jako względne odchylenie standardowe (RSD), natomiast dokładność określono na podstawie błędu względnego (RE %).
2.6.4. Odzysk ekstrakcji i efekt matrycy
Odzyskiwanie ekstrakcji jedenastu analitów przy trzech poziomach stężenia i IS oceniano, porównując powierzchnie pików uzyskanych z ekstrahowanych próbek z powierzchniami pików próbek poekstrahowanych. Efekt matrycy próbek i IS zostały oszacowane przez stosunek powierzchni piku analitów w próbkach poekstrakcyjnych z kolcami do tych uzyskanych z próbek nieekstrahowanych. Zarówno odzysk ekstrakcji, jak i efekt matrycy były badane w sześciu równoległych próbach.
2.6.5. Stabilność
Stabilność analitów w próbkach osocza została określona przez analizę próbek QC o trzech poziomach stężenia w różnych warunkach: przechowywanych w autosamplerze przez 12 h, w temperaturze pokojowej przez 6 h, w trzech cyklach zamrażania-rozmrażania i przechowywanych w temperaturze -70°C przez 14 dni. Wszystkie badania stabilności były mierzone w sześciu powtórzeniach.
2.7. Badanie farmakokinetyczne
Szczury męskie Sprague-Dawley (230-250 g) otrzymano z Beijing HFK Experimental Animal Technology Co. Szczury były utrzymywane w kontrolowanych warunkach środowiskowych i pościły przez 12 godzin ze swobodnym dostępem do wody przed eksperymentami. Ekstrakty TMYX rozpuszczono w CMC-Na i podawano szczurom doustnie w dawce 8,3 g/kg. Próbki krwi (200 μL) pobierano z żyły oczodołowej szczura w 0, 0,03, 0,083, 0,17, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12, 24, 36 i 48 h po podaniu doustnym do heparynizowanych probówek. Następnie próbki krwi odwirowano przy 7000 obr/min przez 10 min, aby natychmiast uzyskać próbkę osocza. Ostatecznie, uzyskane osocze przechowywano w temperaturze -70°C do czasu analizy. Parametry farmakokinetyczne zostały obliczone za pomocą programu komputerowego „Drug and Statistics 2.0” (DAS 2.0) (Medical College of Wannan, China).
3. Wynik i dyskusja
3.1. Metoda HPLC-MS/MS
Przetestowano kilka faz ruchomych. W porównaniu z gradientem systemu fazy ruchomej z acetonitrylem-woda lub metanolem-woda, faza ruchoma zawiera 0,1% kwasu mrówkowego w wodzie może poprawić kształt piku i zwiększyć odpowiedź sygnału analitów. Tak więc, wybraliśmy wodę zawierającą 0,1% kwasu mrówkowego jako fazę ruchomą.
Roztwory standardowe analitów i standard wewnętrzny zostały wstrzyknięte do spektrometru masowego, odpowiednio. Ononina i schisandryna były badane w trybie jonów dodatnich, podczas gdy inne w trybie jonów ujemnych. Zoptymalizowane przejścia prekursor-produkt monitorowano na poziomie 238,9→211,0 dla reiny, 269,0→225,0 dla emodyny, 405,2→242,8 dla glikozydu stilbenowego, 417,1→255,0 dla likwirytyny, 431,2→269,1 dla ononiny, 623.0→161,1 dla werbaskozydu, 169,0→125,1 dla kwasu galusowego, 433,3→384,2 dla schisandryny, 255,3→119,1 dla liquiritigeniny, 821,1→350,5 dla kwasu glicyretynowego, 255,1→118,9 dla izoliquiritigeniny i 721,0→513,2 dla IS. Wszystkie dane zostały przedstawione w tabeli 1.
3.2. Przygotowanie próbki
W eksperymencie przetestowaliśmy dwie metody pozbywania się próbki osocza, w tym ekstrakcję ciecz-ciecz (LLE) i wytrącanie białka (PPT). Wyniki pokazują, że zarówno odzysk, jak i efekty matrycowe tych metod spełniają wymagania dla oznaczania próbek biologicznych, a substancje endogenne nie zakłócają analizy. Jednakże, metoda PPT wykazała niższą wydajność ekstrakcji i relatywnie wyższy efekt matrycy. W związku z tym, wybraliśmy ekstrakcję ciecz-ciecz (LLE) z octanem etylu do przygotowania próbki.
3.3. Walidacja metody
3.3.1. Specyficzność
Swoistość oszacowano przez porównanie chromatogramów ślepych próbek krwi od sześciu różnych szczurów z próbkami krwi zawierającymi anality. Uzyskano dostęp do reprezentatywnych chromatogramów ślepej próbki krwi, ślepej próbki krwi zawierającej jedenaście analitów i IS oraz próbki osocza uzyskanej od szczura po doustnym podaniu ekstraktów TMYX. Czas retencji reiny, emodyny, glikozydu stilbenu, likwirytyny, ononiny, werbaskozydu, kwasu galusowego, schisandryny, likwirytygeniny, kwasu glicyretynowego, izoliquiritigeniny i IS wynosił odpowiednio 15,93, 17,63, 11,34, 11,31, 12,21, 11,01, 6,48, 16,41, 13,21, 13,34, 14,41 i 12,19 min. Na podstawie chromatogramów można stwierdzić, że substancje endogenne w próbkach osocza nie zakłócają oznaczania analitów i IS. Chromatogramy zostały przedstawione na rysunku 2.
(a)
(b)
(c)
(a)
(b)
(c)
3.3.2. Liniowość i czułość
Wyniki krzywych kalibracyjnych, zakresy liniowe, współczynniki korelacji i LLOQ zostały przedstawione w Tabeli 2. Krzywe kalibracji osocza zostały skonstruowane w zakresie 8-2000 ng/mL dla kwasu glicyryzynowego; 4-1000 ng/mL dla likirytyny; 0.8-200 ng/mL dla emodyny, kwasu galusowego, ononiny, schisandryny i glikozydu stilbenowego; 0.4-100 ng/mL dla izoliquiritigeniny, likirytygeniny, reiny i werbaskozydu.
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
LLOQs dla 11 analitów w próbce osocza były mniejsze niż 8 ng/mL, które są wystarczająco czułe dla badań farmakokinetycznych.
3.3.3. Precyzja i dokładność
W tym badaniu, precyzja i dokładność wewnątrz- i międzydobowa były analizowane na trzech poziomach stężenia w sześciu powtórzeniach. Dane zostały przedstawione w Tabeli 3. RSD precyzji śród- i międzydobowej mieściła się w zakresie od 0,7 do 9,3%. Dokładność RE mieściła się w granicach ±14,0%. Wyniki sugerują, że metoda jest dokładna i powtarzalna dla analizy wszystkich analitów w osoczu szczurów.
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
3.3.4. Odzysk ekstrakcji i efekt matrycy
Wszystkie dane dotyczące odzysku ekstrakcji i efektu matrycy zestawiono w tabeli 4. Odzysk ekstrakcji 11 składników na trzech poziomach stężenia mieścił się w zakresie 85,2-109,1%. Efekty matrycowe dla wszystkich analitów wahały się od 89,2 do 113,4%. Dane te świadczą o tym, że procedura eksperymentu jest skuteczna, a efekty matrycowe mogą być ignorowane.
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
3.3.5. Stabilność
W celu zbadania stabilności analitów przetestowano próbki QC o trzech poziomach stężeń w różnych warunkach przechowywania, w tym przechowywane w autosamplerze przez 12 h po przygotowaniu, w temperaturze pokojowej przez 6 h, w trzech cyklach zamrażania-rozmrażania oraz w temperaturze -70°C przez 14 dni. Jak pokazano w tabeli 5, wyniki sugerują, że anality są stabilne w powyższych warunkach.
|
||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
3.4. Badanie farmakokinetyczne
Zwalidowana metoda LC-MS/MS została zastosowana do badania farmakokinetycznego jedenastu analitów w próbce krwi szczura po doustnym podaniu TMYX w pojedynczej dawce 8,3 g/kg. Główne parametry farmakokinetyczne przedstawiono w Tabeli 6. A średnie profile czasu trwania stężenia w osoczu jedenastu składników czynnych przedstawiono na rycinie 3.
|
|||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Tmax reiny, emodyny, glikozydu stilbenowego, likwirytyny, ononiny, werbaskozydu, kwasu galusowego i schisandryny wynoszą 0.36±0,31 h, 0,32±0,14 h, 0,50±0,31 h, 0,50±0,46 h, 0,46±0,10 h, 0,37±0,18 h, 0,75±0,67 h, i 1,00±0,92 h, odpowiednio. Tmax wskazuje, że osiem składników jest szybko wchłanianych. Podwójne szczyty są wykrywane w średnich profilach czasu stężenia w osoczu dla liquiritigenin, kwasu glicyryzynowego i izoliquiritigenin. Pierwszy szczyt trzech składników pojawił się na 0,20 h, 2,13 h, i 0,28 h, a drugi szczyt na 7,20 h, 17,67 h, i 7,00 h, odpowiednio. Może to wynikać z krążenia wątrobowo-jelitowego. Po doustnym podaniu Radix glycyrrhizae lub kombinacji Radix glycyrrhizae i Ramulus cinnamomi w osoczu szczurów odnotowano jeden szczytowy profil czasu stężenia likwirytygeniny, izoliquiritigeniny i kwasu glicyryzynowego. Różnice te mogą wynikać z działania innych ziół w TMYX, co wymaga dalszych badań. Oprócz podwójnych szczytów, okresy półtrwania eliminacji (t1 /2) reiny, emodyny, kwasu galusowego, glicyryzyny, glikozydu stilbenowego, werbaskozydu, formononetyny i schisandryny wahają się od 1,53 h do 4,21 h, co sugeruje, że te osiem analitów w próbce krwi szczurów jest eliminowanych w krótkim czasie po podaniu doustnym. Podobny trend farmakokinetyczny schisandryny został odnotowany po doustnym podaniu wodnego ekstraktu Fructus schisandrae. Stwierdzono również, że jeden szczyt obserwowano dla emodyny i kwasu galusowego u szczurów, którym podawano Radix polygoni multiflori. T1 /2 liquiritigenin, kwasu glicyretynowego i izoliquiritigenin są 12,70 h, 18,19 h, i 13.46 h, co wskazuje, że składnik ma dłuższy czas leczenia, zwłaszcza izoliquiritigenin i kwasu glicyryzynowego, które mogą być nadal wykrywane in vivo w 48 h.
4. Wnioski
W naszym eksperymencie opracowaliśmy metodę HPLC-MS/MS do wykrywania reiny, emodyny, glikozydu stilbenowego, likirytyny, ononiny, werbaskozydu, kwasu galusowego, schisandryny, likirytyny, kwasu glicyretynowego i izoliquiritigeniny w osoczu szczurów. Parametry farmakokinetyczne byłyby pomocne w dalszym rozwoju i zastosowaniu klinicznym preparatu TMYX. 11 aktywnych składników TMYX, które zostały wchłonięte do osocza, dostarczyłyby danych wspierających poprawę kontroli jakości.
Dostępność danych
Dane wykorzystane do poparcia wyników tego badania są dostępne na życzenie od autora.
Konflikt interesów
Autorzy deklarują brak konfliktu interesów.
Podziękowania
Badanie to było wspierane przez National Natural Science Foundation of China (81673824 i 81503457) oraz Tianjin Municipal Education Commission Research Project (2017KJ139).
